[发明专利]用于检测多种病原体的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种用于检测肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团菌的试剂盒包括含有检测试剂的检测管、阳性质控品和和无RNase水组成；其中，检测试剂单管分装，为干粉形态，包括有肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团菌的特异性保守序列的引物及Taqman荧光探针。可对肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团菌进行快速准确检测，且能在各种环境中简便易用，保证了检测的时效性、特异性和灵敏度；针对肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团菌各自的保守序列上设计特异性引物探针，可以同时检测并区分出肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团菌；解决了低温保存和使用操作繁琐的问题，检测试剂可在4℃低温或常温下保存，使用时仅需加入提取好的核酸样本即可上机检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于检测肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团菌的试剂盒及其使用方法。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,CP)和嗜肺军团菌(Legionella pneumoniae,LP)感染是全球重要的感染性疾病，可在各年龄组儿童发病，以呼吸道感染最为常见，感染部位可贯穿整个呼吸道，且具有一定的传染性。MP、CP、LP是儿童急性上呼吸道感染常见的致病菌，也是引起社区获得性肺炎的主要病原菌。三种病原菌引起的肺炎支原体肺炎、肺炎衣原体肺炎和嗜肺军团菌肺炎为非典型肺炎，在症状、体征及辅助检查方面无特异性，病原体检测有局限性，易于误诊，利用分子技术可以快速、准确地进行诊断，从而配合正确的治疗，减少抗菌药物的滥用。由这三种病原体引起的呼吸道感染所占比重较高，且三者的混合感染也日渐增多，同时检测、快速检测三种病原体的产品越来越有需求。

肺炎支原体是无细胞壁，介于病毒和细菌之间能自我复制进行独立生活的最小微生物，革兰氏染色阴性。MP可以引起支原体肺炎、上呼吸道感染、支气管炎、肺脓疡、免疫性溶血性贫血、脑膜脑炎、心肌炎、心包炎、肾炎、社区获得性肺炎等疾病。MP有很强的传染性，主要由口、鼻分泌物以气溶胶微粒的形式通过呼吸道传播，其潜伏期较长，存在全年散发、秋冬季高发的特点，会小范围内流行，引起集体感染，如幼儿园、学校、家庭成员交叉感染等。文献报道的阳性检出率达到15％～35％，另外，15％～20％社区获得性肺炎是由肺炎支原体引起的，在儿童社区获得性肺炎中更是占到20％左右。

肺炎衣原体是介于病毒与细菌之间的专属细胞内寄生的病原体，在宿主细胞内生长、繁殖和形成包涵体。传染途径与MP一样是通过呼吸道分泌物在人-人之间传播，在半封闭环境可存在小范围流行。根据遗传学和生物学分为TWAR、考拉和马3个生物变种，代表株为TW-183T(ATCC VR 2282T)，是一种常见的人类呼吸道致病菌。CP可以引起急性呼吸道感染如咽炎、喉炎、鼻窦炎中耳炎、支气管炎及肺炎等，以肺炎最常见，支气管炎次之；还可以引起心肌炎、心内膜炎、动脉硬化和冠心病、虹膜炎、肝炎、脑膜炎和关节炎等疾病。潜伏期约为10天，一年四季均可感染，其流行可呈散发性或爆发性传播，尤其在空间相对封闭、人群聚集较多、空气不太流通的公共场所，文献报道的阳性检出率5％～20％。目前的诊断主要靠病原体的分离和血清学抗体的检测，但时间长、操作复杂，而荧光PCR检测可用于急性感染诊断及特殊人群流行病学研究。