[发明专利]一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸及其检测方法

说明书

本发明主要是提供一种不需要特定场地仪器，操作简单，方便上手，前处理简单，用时短，可用于田间等现场快速筛选检测的一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸及其检测方法。该速测试纸包括底板，所述的底板从左至右依次并排粘贴有样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸收垫。该速测试纸可用于植物叶片种子、散粮等样本的检测。

技术领域

本发明是一种速测试纸，特别涉及一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸及其检测方法。

背景技术

麦草畏学名3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸(3,6-dichloro-2-methoxybenzoicacid)，是一种内吸性选择除草剂，其除草机理与2,4-D类相似，通过破坏阔叶杂草的天然激素平衡，干扰敏感植物的正常生长，达到除草目的。麦草畏对一年生和多年生阔叶杂草有显著除草效果，通常用于防除小麦田杂草，双子叶植物大豆、棉花等对麦草畏比较敏感，植物接触后容易产生药害。

孟山都公司开发的MON 87708大豆(OECD唯一识别编号MON--9)含有一个来自嗜麦芽寡养单孢菌(Stenotrophomonas maltophilia)的麦草畏单加氧酶基因(dmo)，该基因表达的麦草畏单加氧酶(DMO)能迅速使麦草畏去甲基化，形成二氯水杨酸和甲醛，从而使麦草畏失去除草活性，使得MON 87708大豆植株耐受麦草畏除草剂。由于麦草畏可以有效地控制对草甘膦除草剂产生抗性的阔叶类杂草或木本植物，因此将抗麦草畏与抗草甘膦性状结合应用可以更有效地控制阔叶类和禾本科杂草产生对除草剂的抗性。

目前检测DMO转基因的方法为PCR，需要专门的实验室场地，需要借助专门的仪器设备，并且对操作人员要求较高，需要有相当的专业知识、技能和操作经验，检测过程前处理复杂，所需时间很长。

发明内容

本发明主要是解决现有技术中存在的不足，提供一种不需要特定场地仪器，操作简单，方便上手，前处理简单，用时短，可用于田间等现场快速筛选检测的一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸及其检测方法。

本发明的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的：

一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸，包括底板，所述的底板从左至右依次并排粘贴有样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸收垫。

作为优选，所述的样品垫为玻璃纤维膜；所述的标记垫的表面涂覆有胶体金标记的鼠抗DMO单克隆抗体；所述的硝酸纤维素膜包括包被有鼠抗DMO单克隆抗体的检测区和包被有抗鼠IgG二抗的控制区。

作为优选，其中鼠抗DMO单克隆抗体是通过用DMO重组蛋白免疫BALB/c小鼠，选择状态良好的、对HAT敏感的SP2/0细胞株与免疫鼠脾细胞进行融合，有限稀释法克隆3次至阳性率达到100％，细胞建株，扩大培养，获得杂交瘤细胞株；并通过制备腹水并纯化得到大量鼠抗DMO单克隆抗体。

作为优选，其中DMO重组蛋白是通过将pET30a-DMO阳性质粒转化BL21(DE3)，大量表达并纯化得到DMO重组蛋白。

作为优选，所述的胶体金标记的鼠抗DMO单克隆抗体的涂覆量为5ng-50ng，所述的硝酸纤维素膜上鼠抗DMO单克隆抗体的量为0.4μg-1.2μg。

一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸的检测方法，按以下步骤进行：

首先将速测试纸垂直插入检测样品中,不超过箭头位置；样品溶液沿样品垫渗透至胶体金标记抗体的试纸条，如果样品溶液中含转基因蛋白DMO，那么DMO蛋白将与金标试纸条上的鼠抗DMO单克隆抗体结合，并与NC膜上的鼠抗DMO单克隆抗体结合，8-10min后，可于观察区中观察到检测区的颜色变化，即出现阳性条带；如果样品溶液中不含转基因蛋白DMO，那么检测区则观察不到阳性条带。而无论样品溶液中是否含转基因蛋白DMO，当样品溶液到达硝酸纤维素膜时，金标试纸条上的鼠抗DMO单克隆抗体均可与控制区包被的抗鼠IgG二抗结合，从而显色；