[发明专利]一种与罗丹明B特异性结合的核酸适配体RhB-F02及其应用

说明书

本发明公开了一种利用SELEX技术筛选得到与罗丹明B特异性结合的核酸适配体RhB‑F02，所述的核酸适配体是单链DNA，由82个核苷酸组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；其二级结构含有突出的环和茎，且存在G‑四链体结构，其中RhB‑F02吉布斯自由能DG=‑10.97。基于酶联寡核苷酸吸附测定法进行核酸适配体特异性、亲和力和灵敏度等一系列性质评估，显示RhB‑F02解离常数K_d=20.89±2.37 nM，且能特异性与罗丹明B结合，因此该核酸适配体具有高特异性、高亲和力的特点，可快速、灵敏地用于罗丹明B的检测。

技术领域

本发明涉及一种与罗丹明B特异性结合的核酸适配体及其应用，属于生物医学技术领域。

背景技术

核酸适配体是经过指数富集配体系统进化技术(SyStematic evolution ofligandS by exponential enrichment，SELEX)筛选得到能与金属离子、小分子、生物大分子，甚至整个细胞高特异性且高亲和性结合的ssDNA或RNA。核酸适配体不仅具备抗体分子的特异识别性，凡是涉及抗体的诊断领域，几乎都可以用核酸适配体来代替，而且还具备自身独特的优异性能，其具有靶分子范围广、分子质量小、免疫原性低、易于化学合成、改造和标记等优点。近年来，核酸适配体在治疗新药、药物运输、癌细胞检测、生物成像、生物标志物的发现、毒品检测、抗病毒等生物医学领域中均有应用。

罗丹明B(Rhodamine B)又称玫瑰红B或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。罗丹明B在溶液中有强烈的荧光，一般用作于实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。但是由于罗丹明B具有价格低廉、色泽红艳、稳定性强等特点，许多不法商家为了牟取暴利，将其替代食品添加剂中的着色剂，添加在辣椒粉和辣椒油等食物中，其目的是使食品美观，但是大量添加罗丹明B会给人们的饮食安全带来极大的隐患。据调查，罗丹明B会使摄取、吸入以及皮肤接触者产生一系列不适症状，如头晕、呕吐、腹痛、白细胞增高等症状，进而造成急性或慢性的中毒伤害。相关资料显示，罗丹明B还会破坏蛋白质染色，许多实验也进一步证明了罗丹明B会引起老鼠皮下组织产生肉瘤，并具有潜在的致癌和致畸性。

目前，检测罗丹明B的方法主要有高效液相色谱法和高效液相串联质谱法两种。但是这两种检测方法都需要特定的仪器设备、较好的专业知识和一定的操作技能，无法广泛应用。为了保证广大人民群众的身体健康，打击不法商贩，建立一种准确可靠、灵敏快速、广泛适用的检测罗丹明B的方法在食品安全工作中显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种与罗丹明B特异性结合的核酸适配体RhB-F02，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；该核酸适配体为单链DNA，由82个核苷酸组成，拓扑学结构为直链状；预测的二级结构具有突出的环和茎，且存在G-四链体结构，吉布斯自由能DG=-10.97。

本发明另一目的是将上述与罗丹明B特异性结合的核酸适配体RhB-F02应用在制备检测食品中罗丹明B的试剂或在制备检测食品中罗丹明B的试剂盒中。

与罗丹明B特异性结合的核酸适配体RhB-F02的特异性、亲和力和灵敏度等一系列性质评估，主要基于酶联寡核苷酸吸附测定法（ELONA）。

本发明通过如下方案实现发明目的：

1、罗丹明B特异性核酸适配体的筛选、克隆、分离和测序