[发明专利]一种提取铁皮石斛多糖的方法

说明书

本发明公开了一种提取铁皮石斛多糖的方法，具体包括以下步骤：将铁皮石斛粉按1g：30～50mL的料液比与深度共熔溶剂(氢键受体：氢键供体＝3：1～18，mol/mol)混合均匀，再按4～8mg/mL的比例加入纤维素酶和果胶酶中的至少一种，在30～60℃下提取90～120min，将所得提取液分离纯化后得到铁皮石斛多糖；与传统的酶法水提取相比，本发明使用的酶辅助深度共熔溶剂提取具有低挥发性、高稳定性和反应体系温和的特点，能够减少提取液杂质、减少溶剂损耗、降低纯化负担，使多糖提取率提高10％以上，多糖含量增加10％以上。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种提取铁皮石斛多糖的方法。

背景技术

根据《神农本草经》和《中华人民共和国药典》记载铁皮石斛为多年附生草本植物，具有延年益寿，益胃生津，滋阴清热，用于口干烦渴，食少干呕，病后虚热不退，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软。在《中国植物红皮书》和《中国濒危珍稀植物》中列为濒危物种，加上市场需求量大和不合理开采野生铁皮石斛，导致珍贵稀缺、生长条件苛刻的铁皮石斛野生资源日渐枯竭，现被列为国家二级保护植物。铁皮石斛成分主要包含多糖、生物碱、氨基酸、微量元素、菲类化合物等，其主要成分多糖具有很强的生物活性如抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力、降低血糖血脂和缓解疲劳等，加上多糖的含量作为衡量铁皮石斛药效的标准之一，因而从铁皮石斛中提取多糖成分进行开发成为当今一个研究热点。

传统提取多糖的方法包括热水提取、酸法提取、碱法提取、酶辅助提取、超声波辅助提取等，其中，酶辅助提取法提取效果更佳，条件更温和，有利于实现工厂化生产。然而，普遍使用的热水提取法，提取温度较高，耗时长，水溶性杂质多，分离纯化困难。唐政等在“混合酶提法提取铁皮石斛中石斛多糖的优化工艺研究”中提供了一种纤维素酶和果胶酶混合提取石斛多糖的方法，成功地在较低温度(50℃左右)下达到40％以上的多糖提取率。但是，在水溶剂中需要加缓冲剂调节pH以保证复合酶的活性，酶的活性随pH变化的波动性很大，使得提取率不够稳定；pH值在水溶剂中的变化还会导致多糖的水解损失。

深度共熔溶剂(Deep Eutectic Solvents)具有低毒性、熔点低、比例可调节、易于生物降解、化学性质稳定可回收利用等优点，在分离天然产物等领域迅速成为热点，如中国专利申请CN201711009235.7提供了一种低共熔溶剂/盐双水相萃取分离锁阳多糖的方法，但其使用的是超声提取法，多糖的提取率依然不高；且其指出酶辅助方法存在得率较低等缺陷，并未进行相关研究。

由此可见，目前还缺乏将深度共熔溶剂和酶提取法相结合以进一步高效提取多糖的技术。

发明内容

为解决现有技术的缺点和不足之处，本发明的目的在于提供一种提取铁皮石斛多糖的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种提取铁皮石斛多糖的方法，包括以下步骤：

将铁皮石斛粉按1g：30～50mL的料液比与深度共熔溶剂混合均匀，再按4～8mg/mL的比例加入酶，在30～60℃下提取90～120min获得提取液，将所得提取液分离纯化后得到铁皮石斛多糖；

所述深度共熔溶剂中氢键受体和氢键供体的摩尔比为3：1～18；

所述酶是指纤维素酶和果胶酶中的至少一种。

优选的，所述酶为等量混合的纤维素酶和果胶酶。

优选的，所述氢键受体为氯化胆碱、氯化锌、乳酸中的至少一种，所述氢键供体为甘油、乙二醇、山梨醇、三甘醇、1，4-丁二醇、木糖醇、乙酰丙酸、对甲苯磺酸、酒石酸、草酸、丙二酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、尿素、乙酰胺、乙酰钠中的至少一种。

优选的，所述分离纯化是指将所得提取液固液分离后，取上清液用弱极性大孔树脂纯化得到粗糖液；随后依次进行透析、真空浓缩、醇沉、分级分离、真空浓缩、真空冷冻干燥后得到铁皮石斛多糖。