[发明专利]一种与甲胺磷特异性结合的核酸适配体Met-G02及其应用

说明书

本发明公开了一种利用SELEX技术筛选得到与甲胺磷特异性结合的核酸适配体Met‑G02，所述的核酸适配体是单链DNA，由82个核苷酸组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；其二级结构含有突出的环和茎，且存在G‑四链体结构，其中Met‑G02吉布斯自由能DG=‑15.21。基于酶联寡核苷酸吸附测定法进行核酸适配体特异性、亲和力和灵敏度等一系列性质评估，显示Met‑G02解离常数K_d=11.77±2.07 nM，且能特异性与甲胺磷结合，因此该核酸适配体具有高特异性、高亲和力的特点，可快速、灵敏地用于甲胺磷的检测。

技术领域

本发明涉及一种与甲胺磷特异性结合的核酸适配体Met-G02及其应用，属于生物医学技术领域。

背景技术

核酸适配体是经过指数富集配体系统进化技术(SyStematic evolution ofligandS by exponential enrichment，SELEX)筛选得到的能与金属离子、小分子、生物大分子，甚至整个细胞高专一性和亲和性结合的SSDNA或RNA分子。核酸适配体不仅具备抗体分子的识别特性，凡是涉及抗体的诊断领域，几乎都可以用核酸适配体来代替，而且还具备自己独特的优异性能，其具有靶分子范围广、分子质量小、免疫原性低、易于化学合成、改造和标记等优点。核酸适配体及其相关筛选技术(SELEX)，核酸适配体近年来在治疗新药、药物运输、癌细胞检测、生物成像、生物标志物的发现、毒品检测、抗病毒等生物医学领域中的应用。

甲胺磷（Methamidophos），是一种有机磷化合物，通常用作农药，它是一种广谱高效杀虫剂，用于防治棉花红蜘蛛、蚜、螨等，对抗药性虫害有良好防治效果，在中国大陆的商品名为多灭灵。但是喷洒过甲胺磷的农作物在作为食品原材料的加工过程中，因为处理不当可能会有残留，而食用含有甲胺磷的食物，会给人体的健康带来巨大的危害。2008年1月，有消费者购买饺子食用之后，全家出现中毒症状，该饺子被化验出含甲胺磷残留。并且甲胺磷对环境可能存在危害，它可以通过多种途径流进水体中，给人们的日常饮用水带来安全问题。甲胺磷会抑制胆碱酯酶活性，造成神经生理功能紊乱。短期内接触(口服、吸入、皮肤、粘膜)大量引起急性中毒。表现有头痛、头昏、食欲减退、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、流涎、瞳孔缩小、呼吸道分泌物增多、多汗、肌束震颤等。重者出现肺水肿、脑水肿、昏迷、呼吸麻痹。部分病例可有心、肝、肾损害。少数严重病例在意识恢复后数周或数月发生周围神经病，个别严重病例可发生迟发性猝死，血胆碱酯酶活性降低。由于毒性强，中国大陆从2008年起亦公告停止生产及使用。

目前，检测甲胺磷的方法主要是气相色谱法。该种检测方法需要特定的仪器设备、专业操作人员和一定的操作技能，无法广泛应用。因此为保证广大人民群众的身体健康，建立一种准确可靠、灵敏快速、广泛适用的检测食品或水体中甲胺磷的方法显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种与甲胺磷特异性结合的核酸适配体Met-G02，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；该核酸适配体为单链DNA，由82个核苷酸组成，拓扑学结构为直链状；预测的二级结构具有突出的环和茎，且存在G-四链体结构，吉布斯自由能DG=-15.21。

本发明另一目的是将上述与甲胺磷特异性结合的核酸适配体Met-G02应用在制备检测食品中甲胺磷的试剂或在制备检测食品中甲胺磷的试剂盒中。

本发明通过如下方案实现发明目的：

1、甲胺磷特异性核酸适配体的筛选、克隆、分离和测序