[发明专利]一种高产白藜芦醇大肠杆菌工程菌的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种高产白藜芦醇的大肠杆菌工程菌株，其特征在于：所述工程菌为BL21-pETduet-sts-4cl，其基因序列为SEQ ID NO: 1，在工程菌E.coli BL21中能够进行STS酶蛋白和4CL酶蛋白的表达，以及高效转化底物4-香豆酸合成白藜芦醇。

2.根据权利要求1所述的一种高产白藜芦醇的大肠杆菌工程菌株，其特征在于：所述工程菌为BL21-pETduet-4cl::sts，其基因序列为SEQ ID NO: 2，在工程菌E.coli BL21中能够进行融合蛋白4CL::STS的表达，以及高效转化底物4-香豆酸合成白藜芦醇。

3. 根据权利要求1所述的一种高产白藜芦醇的大肠杆菌工程菌株，其特征在于： 所述工程菌为BL21-pETduet-sts::4cl，其基因序列为SEQ ID NO: 3，在工程菌E.coli BL21中能够进行融合蛋白STS::4CL的表达，以及高效转化底物4-香豆酸合成白藜芦醇。

4. 根据权利要求1所述的一种高产白藜芦醇的大肠杆菌工程菌株，其特征在于：所述工程菌为BL21-pETduet-sts::4cl-aae，其基因序列为SEQ ID NO: 4，在工程菌E.coliBL21中能够进行融合蛋白STS::4CL和AAE蛋白的表达，以及高效转化底物4-香豆酸与丙二酸合成白藜芦醇。

5.根据权利要求4所述的一种高产白藜芦醇的大肠杆菌工程菌株，其特征在于：sts为葡萄中的芪合酶基因，4cl为拟南芥中的4-香豆酰CoA合成酶基因，aae为拟南芥中的丙二酰CoA合成酶基因。

6.一种根据权利要求1-5任一项所述高产白藜芦醇工程菌的构建方法，步骤包括：

从葡萄中克隆出来sts基因、从拟南芥中克隆出来4cl基因和aae基因；

将sts和4cl分别构建到共表达载体pETduet-1的MCS1及MCS2中，获得重组质粒pETduet-sts-4cl，利用其转化大肠杆菌BL21，得到工程菌BL21-pETduet-sts-4cl，抗性为Amp；

将4cl和sts通过linker连接，组成融合片段4cl::sts（其中4cl在前，sts在后），构建到共表达载体pETduet-1的MCS1中，获得重组质粒pETduet-4cl::sts，利用其转化大肠杆菌BL21，得到工程菌BL21-pETduet-4cl::sts，抗性为Amp；

将sts和4cl通过linker连接，组成融合片段sts::4cl（其中sts在前，4cl在后），构建到共表达载体pETduet-1的MCS1中，获得重组质粒pETduet-sts::4cl，利用其转化大肠杆菌BL21，得到工程菌BL21-pETduet-sts::4cl，抗性为Amp；

将aae基因构建到重组质粒pETduet-sts::4cl的MCS2中，获得重组质粒pETduet-sts::4cl-aae，利用其转化大肠杆菌BL21，得到工程菌BL21-pETduet-sts::4cl-aae，抗性为Amp。

7.根据权利要求1-5任一项所述的高产白藜芦醇的大肠杆菌工程菌株在生产白藜芦醇中的应用。