[发明专利]一种包膜病毒颗粒的分离方法及组合物

权利要求书

1.一种用于分离包膜病毒颗粒的方法，包括将病毒液进行阴离子交换层析和羟基磷灰石层析操作，其中，阴离子交换层析在羟基磷灰石层析之前进行；阴离子交换层析和羟基磷灰石层析之间没有中间层析操作，其特征在于，

阴离子交换层析包括：

a)上样操作：将病毒液上样至离子交换层析柱；

b)洗脱操作：使用离子交换洗脱液对离子交换层析柱进行洗脱；

羟基磷灰石层析包括：

a)上样操作：将经过阴离子交换层析后的样液上样至羟基磷灰石层析柱；

b)洗脱操作：使用羟基磷灰石洗脱液对羟基磷灰石层析柱进行洗脱；

离子交换洗脱液和羟基磷灰石洗脱液的pH值独立为7.0～9.5，独立为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、TEA缓冲液或巴比妥钠缓冲液，缓冲液中离子的浓度为1～50mM；

离子交换洗脱液中进一步添加有浓度为50～1000mM的盐；

羟基磷灰石洗脱液中进一步添加有浓度为1～500mM的盐。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括使用第二离子交换洗脱液对离子交换层析柱进行洗脱。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，分别收集洗出的第一离子交换洗脱液和第二离子交换洗脱液，获得不同结构、组成或纯度的病毒颗粒。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括使用第二羟基磷灰石洗脱液对羟基磷灰石层析柱进行洗脱。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，分别收集洗出的第一羟基磷灰石洗脱液和第二羟基磷灰石洗脱液，获得不同结构、组成或纯度的病毒颗粒。

6.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，离子交换洗脱液和羟基磷灰石洗脱液为磷酸缓冲液。

7.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，包膜病毒包括狂犬病毒、流感病毒、乙型脑炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、水痘病毒、腮腺炎病毒、登革热病毒和艾滋病毒。

8.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，阴离子交换层析进一步包括以下操作中的至少一个：

预平衡操作：包括使用离子交换预平衡液对离子交换层析柱进行预平衡；

平衡操作：包括使用离子交换平衡液对离子交换层析柱进行平衡；

预洗脱操作：包括使用离子交换预洗脱液对离子交换层析柱进行预洗脱；

其中，离子交换预平衡液、离子交换平衡液和离子交换预洗脱液的pH值独立为7.0～9.5，独立为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、TEA缓冲液或巴比妥钠缓冲液，缓冲液中离子的浓度为1～50mM；

离子交换预平衡液中进一步添加有浓度为1～500mM的盐；

离子交换平衡液中进一步添加有浓度为1-500mM的盐；

离子交换预洗脱液中进一步添加有浓度为1～700mM的盐。

9.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，羟基磷灰石层析进一步包括以下操作中的至少一个：

预平衡操作：包括使用羟基磷灰石预平衡液对羟基磷灰石层析柱进行预平衡；

平衡操作：包括使用羟基磷灰石平衡液对羟基磷灰石层析柱进行平衡；

预洗脱操作：包括使用羟基磷灰石预洗脱液对羟基磷灰石层析柱进行预洗脱；

其中，羟基磷灰石预平衡液、羟基磷灰石平衡液和羟基磷灰石预洗脱的pH值独立为7.0～9.5，独立为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、TEA缓冲液或巴比妥钠缓冲液，缓冲液中离子的浓度为1～50mM；

羟基磷灰石预平衡液中进一步添加有浓度为1～500mM的盐；

羟基磷灰石平衡液中进一步添加有浓度为1～500mM的盐；

羟基磷灰石预洗脱液中进一步添加有浓度为1～200mM的盐。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，羟基磷灰石层析进一步包括以下操作中的至少一个：

预平衡操作：包括使用羟基磷灰石预平衡液对羟基磷灰石层析柱进行预平衡；

平衡操作：包括使用羟基磷灰石平衡液对羟基磷灰石层析柱进行平衡；

预洗脱操作：包括使用羟基磷灰石预洗脱液对羟基磷灰石层析柱进行预洗脱；

其中，羟基磷灰石预平衡液、羟基磷灰石平衡液和羟基磷灰石预洗脱的pH值独立为7.0～9.5，独立为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、TEA缓冲液或巴比妥钠缓冲液，缓冲液中离子的浓度为1～50mM；

羟基磷灰石预平衡液中进一步添加有浓度为1～500mM的盐；

羟基磷灰石平衡液中进一步添加有浓度为1～500mM的盐；

羟基磷灰石预洗脱液中进一步添加有浓度为1～200mM的盐。