[发明专利]一种高通量文库构建试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种高通量文库构建试剂盒及其应用。利用本发明的文库构建试剂盒构建文库的具体流程如下：首先使用内切酶将待测样本的基因组DNA进行平末端修复，将末端补平；然后将修复后片段的3'端用连接酶加上一个腺嘌呤A，再用TA连接方法加上接头，最后进行PCR扩增，富集连接好接头的DNA片段，达到上机测序所需的浓度及片段区间。本发明相比于国内外市场上其他建库试剂盒，DNA片段与接头的连接效率更高，解决了文库构建中的接头自连的残留问题，且连接后在保证固定浓度的同时，杂质去除地更为干净，最主要的是节约了大量成本，在高通量测序中的DNA文库构建方面具有良好市场前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高通量文库构建试剂盒及其应用。

背景技术

自从DNA的双螺旋结构被人们解析开始，人们在探究健康与疾病的基因组的复杂性与差异性上做出了巨大的努力。为了支持人类基因组计划的顺利进行，人们在仪器和试剂上做出了巨大的改进。该计划的完成使得人们强烈的意识到人们需要更多更好的技术与数据分析能力来回答随之而来的一系列生物学问题。然而，通量的限制以及居高不下的测序成本成为了人们进一步了解基因组的障碍。2000年之后推出的高通量测序平台很好地解决了这个问题，人类基因组测序的成本因此直接下降50000倍，并且由此产生了一个新的名词：下一代测序(Next Generation Sequencing，NGS)。在过去的十年中，NGS技术不停的在进步——测序的数据量增加了100-1000倍。这些技术上的进展使得人们甚至可以在一条read上读出整条基因组序列。根据VeritasGenomics的数据，人类基因组测序的成本也已经下降到1000美元/人。不仅如此，该技术已经广泛在临床诊断上得到应用。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于DNA文库构建的试剂盒。

本发明提供的用于DNA文库构建的试剂盒包括如下试剂：PNK缓冲液、T4 DNA聚合酶、dNTP溶液、克列诺酶、T4多聚核苷酸激酶、Blue缓冲液、三磷酸脱氧腺苷、大肠杆菌DNA聚合酶I、快速连接缓冲液、T4 DNA连接酶和PCR扩增缓冲液。

上述试剂盒中，所述PNK缓冲液为PNK Buffer，其具体为10×PNK Buffer；

所述T4 DNA聚合酶为T4 DNA Polymerase，其浓度具体为3U/μl；

所述dNTP溶液为dNTP Solution Set，其浓度具体为10mM。

所述克列诺酶为Klenow Fragment，其浓度具体为5U/μl；

所述T4多聚核苷酸激酶为T4 PNK，其浓度具体为10U/μl；

所述Blue缓冲液为Blue Buffer，其具体为10×Blue Buffer；

所述三磷酸脱氧腺苷为dATP，其浓度具体为1mM；

所述大肠杆菌DNA聚合酶I为Klenow 3'-5'exo-，其浓度具体为50U/μl；

所述快速连接缓冲液为Rapid Ligation Buffer，其具体为2×Rapid LigationBuffer；

所述T4 DNA连接酶为T4 DNA Ligase，其浓度具体为600U/μl；

所述PCR扩增缓冲液为HiFi Mix，其具体为2×HiFi Mix。

本发明的试剂盒还包括接头溶液和通用引物溶液；

所述接头溶液中包括接头1、接头2、接头3、接头4、接头5、接头6、接头7、接头8、接头9、接头10和接头11；所述接头溶液中各个接头的摩尔比相同；