[发明专利]一种ROS1基因检测的试剂盒

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，一种ROS1基因检测的试剂盒，包括ROS1 PCR扩增检测试剂和PCR产物纯化试剂，ROS1 PCR扩增检测试剂由7‑9μL双蒸馏水、3‑4μL 5×Q solution、2‑3μL 25mM MgCl2、2‑3μL 10×buffer、2‑3μL2mM dNTP、0.4μL 20μM特异性引物组、分别针对ROS1的32、34、35外显子的Taqman‑MGB探针、0.2μL Taq 酶组成；本发明提出了一种试剂盒，能够方便对ROS1进行基因检测，其制备简单，使用方便，成本低、易于实施。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种ROS1基因检测的试剂盒。

背景技术

ROS1基因编码一种受体酪氨酸激酶，在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中，ROS1重排的阳性率大约为1～2％,当ROS1与CD74、SLC34A2、SDC4等基因发生融合后，会持续激活ROS1酪氨酸激酶区及其下游JAK/STAT、PI3K/AKT、RAS/MAPK等信号通路，进而引起肿瘤的发生。

2011年，美国食品和药品管理局(FDA)批准克唑替尼用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)。克唑 替尼是一种小分子酪氨酸激酶受体抑制剂，靶向分子包括ALK、肝细胞生长因子受体(HGFR， c-Met)和ROS1。克唑替尼(Crizotinib)对于ROS1融合阳性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者也 有显著疗效，因此ALK融合阴性时，检测ROS1基因的融合状态可以筛选能够从克唑替尼治疗 中获益的患者。

目前对人ROS1融合基因的检测方法中FISH和IHC不能用于肿瘤组织外的其他样本。荧光定量PCR检测灵敏度高，成本相对较低，通量高，周期短，而且适用的 样本范围较广，除可检测组织样本外，还可检测液体样本。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种ROS1基因检测的试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种ROS1基因检测的试剂盒，包括ROS1 PCR扩增检测试剂和PCR产物纯化试剂，ROS1 PCR扩增检测试剂由7-9μL双蒸馏水、3-4μL 5×Q solution、2-3μL 25mM MgCl2、2-3μL 10×buffer、2-3μL2mM dNTP、0.4μL 20μM特异性引物组、分别针对ROS1的32、34、 35外显子的Taqman-MGB探针、0.2μL Taq 酶组成；

探针如下：

探针1：FAM-GCCGCCACAGAGCGAATGGGAGTTTAG-MGB

探针2：FAM-CCATTTGCACTTTGAGGGAGTGTGGAG-MGB

探针3：FAM-TTAGTTCGAATTTTTATTCGTCTAG-MGB

特异性引物组包括以下检测引物的一组或多组：

引物1：CTTCGAATCGTAGTATACGGACA

引物2：TCACCACATATATCGTATTTTGCT

引物3：TGCAAATCAGTCGTCTATTTGCT

引物4：CATATTTGACGCTAATTTGTTGCTGTCTGCT

引物5：AATGTGTGGCAGTTGCCACATTGGTCT

引物6：CATATTTGTATCGTGTACCCGCCAGCATTG

引物7：AGTAGCTAGACTCGACAGGAGCTATG

引物8：GATATTATGCTATCTATGCCTATTG