[发明专利]一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂盒

说明书

本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂。试剂R1中含有Tris缓冲液pH7.5、次黄嘌呤核苷、嘌呤核苷磷酸化酶PNP、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、甘油、丙二醇‑单甲醚、4‑甲基苯硼酸(4‑FPBA)、D‑海藻糖、氯化锂，试剂R2中含有Tris缓冲液pH7.5、2,4,6‑三溴‑3‑羟基苯甲酸(TBHBA)、NaN₃ 0.5g/L，该试剂适合与各种全自动生化分析仪配套使用，准确度和抗干扰能力良好，且具有良好的热稳定性。

技术领域

本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种稳定性强的血清无机磷（酶法）检测试剂。

背景技术

1.背景

人体内含磷(Phosphorus)约17mol(530g)，其中87%存在于骨骼中，其余存在于软组织、细胞内。体内许多重要的物质如某些蛋白质、酯类化合物、核酸、辅酶等都含有磷，在酸碱平衡中磷酸盐也具有重要作用。

血液中的磷可分为4部分：无机磷、有机磷或磷酸酯、含磷脂类和少量的其他磷化物。血液中的磷与骨骼中的磷维持动态平衡，体内的磷主要以磷酸基形式参与许多对生命活动非常重要的物质代谢过程。例如：构成磷脂，进而与蛋白质构成细胞的组成成分；参与能量代谢，尤其是氧化磷酸化过程，形成ATP等；参与DNA、RNA以及许多辅酶(如焦磷酸硫胺素、辅酶I及辅酶II等)的构成；磷还作为某些酶的激活剂或抑制剂，参与多种酶促反应，糖、脂类和蛋白代谢过程中的许多生化反应，也都需要磷参与。

2.临床意义

血清无机磷增高：甲状旁腺功能减退症、假性甲状旁腺功能减退症、维生素D过多症、肾功能不全或衰竭、多发生骨髓瘤和骨折愈合期、急性酸中毒、白血病、淋巴瘤、骨肿瘤、老年性白内障、妊高征孕妇。高磷血症常无症状，但当钙、磷浓度(mg/dl)乘积大于70时，可发生转移性钙化，引起钙盐在关节、韧带、心肌、血管、皮下、角膜、结膜等以为沉淀，临床出现关节痛、眼结膜炎、角膜炎及皮肤瘙痒等症状。此外，高磷血症常伴有不同程度的低钙血症和肾功能衰竭的有关症状。

血清无机磷降低：甲状旁腺功能亢进症、佝偻病或软骨病、糖利用增加、肾小管变性病变、乳糜泻、甲亢、肝硬化和肺心病。

3.检测方法

目前无机磷测定使用的方法有比色法、分光光度法和酶法。

(1)硫酸亚铁磷钼蓝比色法

原理：以三氯醋酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合生成磷钼酸，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成蓝色化合物，进行比色测定。

评价：该方法需要样本除蛋白，操作步骤繁琐，误差大。

(2)紫外分光光度法

原理：血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵作用所形成的复合物，直接在340nm或325nm波长测定其吸光度。

评价：该方法显色稳定，试剂配置简单，且适用于全自动生化分析仪，但由于血清中存在还原性物质，容易导致检测结果不准确。

(3)黄嘌呤氧化酶比色测定法

原理：磷酸盐阴离子与次黄嘌呤核苷酸在嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)的催化下，生成次黄嘌呤和核糖-1-磷酸。黄嘌呤氧化酶氧化次黄嘌呤生成尿酸和过氧化氢。用Trinder反应呈色，吸光度的变化与磷酸盐阴离子的浓度成比例。

评价：该方法操作简便，具有良好的线性、重复性和抗干扰能力，适合全自动生化分析仪。

发明内容