[发明专利]一种获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法

说明书

本发明涉及一种获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法，属于作物遗传育种技术领域，提供了一种利用化学诱变的方法定向筛选芦丁含量变化突变体，方法简便易行，成功率高的获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法，采用的技术方案为选择诱变亲本利用EMS化学诱变的方法对种子进行诱变处理，然后在利用高效液相色谱法定向筛选芦丁含量变化突变体，获得了稳定表达的高（低）芦丁苦荞种质，该方法简便易行，成功率高，开拓了苦荞育种领域，丰富了苦荞种质资源。

技术领域

本发明涉及一种获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法，属于作物遗传育种技术领域。

背景技术

苦荞（tartary buckwheat）是一种药食兼用型作物。其籽粒富含多种对人体有益的氨基酸，维生素及矿物质，是糖尿病的辅助治疗食品，其所含的丰富的黄酮类物质，尤其是芦丁（rutin）在保护心脑血管、清除自由基、抗氧化、抗衰老方面都有极佳的功效。芦丁的来源现主要为槐米，芦丁含量可达10%-28%，可槐米产量，尤其是其中芦丁含量受气候、采收、晾晒条件等影响较大，导致槐米售价不稳定。随着我国人民生活的提高，对芦丁以及其制成的药品需求不断增加，拓宽芦丁来源物种，开发不同组织（如叶片、籽粒等）提取物，筛选高芦丁含量品系等都将成为有效的手段。

随着健康中国观念的提出，苦荞中丰富的芦丁含量及其保健功能日渐被人重视。苦荞目前主要的食用方法均以籽粒为主，有苦荞茶和苦荞粉等。苦荞杂交制种困难一直是苦荞育种的瓶颈。

发明内容

为解决现有技术存在的技术问题，本发明提供了一种利用化学诱变的方法定向筛选芦丁含量变化突变体，方法简便易行，成功率高的获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为一种获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法，按照以下步骤进行操作，

a、选择诱变亲本‘黑丰1号’，该品种为山西省主栽品种，生产性状较好，将50000粒种子浸泡于蒸馏水中，分两份放置于4L矿泉水桶内，振荡过夜；

b、将荡过夜后的种子控干水分，然后利用甲基磺酸乙酯溶液对种子进行化学诱变处理，处理完成，在室温条件下，通风橱内以300rpm/min进行振荡，振荡过夜8-10h，期间轻轻搅动数次；

c、振荡结束后取下处理种子的桶，放置2min，加入等体积配制好的0.2 M 硫代硫酸钠上下颠倒混匀，中和静置15min；

d、用滤网器过滤掉中和过的EMS水溶液，废液倒入通风橱的下水中，加1L蒸馏水冲洗5次，每次将水用滤网器过滤干净，直到流出的溶液没有泡沫状；

e、将所处理的种子倾倒于滤网中，并用塑料袋兜住底部，从通风橱取出后放在洗池中，用流水冲洗5min，空中挂置控干水分，备播；

f、土地旋耕、平整后，将诱变后的种子进行行播：行距30cm开沟，开沟深度5-10cm，每行播30粒种子，第20天统计出苗率，出苗率=出苗数/种子总数×100%，出苗率在30-50%，表示诱变有效；待长出真叶后直至收获，持续统计变异单株，计算变异率，变异率=表型变异数/成苗总数×100%；表型变异统计主要依据为：叶色变异、株型变异、花色变异、花期变异、籽粒颜色变异、籽粒形态变异；

g、单株收获M1代籽粒，单株收获M1代突变体，随机选取1000个单株，高效液相色谱法测定每一单株籽粒的芦丁含量，获得潜在高芦丁突变株系共20个；

h、第二年继续种植上述突变体，并分别种植于两个纬度不同地块，每一地块每一株系各种植10个单株，共收获单株400个；高效液相色谱法分别测定各单株芦丁含量，获得在不同地块都高芦丁含量的株系16个；

i、继续上述方法持续跟踪筛选直至M5代，获得稳定遗传高芦丁含量突变体6个，其中高芦丁突变体2个，低芦丁突变体4个。