[发明专利]一种由NF-κB启动的肿瘤细胞特异效应基因表达载体及其表达产物和应用

说明书

本发明公开了一种由NF‑κB启动的肿瘤细胞特异效应基因表达载体及其表达产物和应用。该基因表达载体包含两个序列元件，调控基因表达的启动子序列与启动子序列下游效应基因编码序列；所述启动子序列由一段NF‑κB应答序列和最小启动子序列组成。当该基因表达载体导入肿瘤细胞内时，细胞内的序列特异性转录因子NF‑κB就会激活该载体，使其表达载体上的效应基因，效应基因表达产物为一种细胞表面的多肽或蛋白质，该细胞表面的多肽或蛋白质不但可以作为新抗原物质激发体内免疫系统对肿瘤细胞的攻击、发挥肿瘤免疫治疗的功效，还可以作为一种肿瘤细胞人工标记，用于肿瘤成像、诊断、细胞分离等。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗技术领域，具体涉及一种由转录因子NF-κB启动的肿瘤细胞特异效应基因表达载体及其表达产物和应用。

背景技术

人类对于癌症治疗有最迫切的期望，科学界和医学界为此坚持不懈地付出探索。癌症是目前困扰人类健康威胁人类生命的重大疾病。虽经发病机理的大量基础研究和各种治疗方法的广泛临床实践，但截至目前，科学界和医学界还没有找到一种可治愈癌症的技术。虽然传统的手术切除加放化疗技术已被普遍用癌症治疗，以及最新的肿瘤免疫疗法也已被探索用于癌症治疗，但治疗的效果还与病人对于健康和生命的期望相差甚远。例如，目前应用最广泛且最有效的肿瘤免疫疗法是PD-1/PD-L1抑制剂(如PD-1抗体)，但其目前的总体应答率却只有20-30％；而在血液恶性肿瘤治疗上有效的CAR-T、TCR-T等细胞治疗，在实体瘤治疗方面还没有实质进展。因此，探索新的癌症治疗技术，在人类可真正治愈癌症前，将始终是科学界和医学界努力的方向。

肿瘤治疗最关键和重要的是找到在癌细胞表面表达的特定抗原。目前肿瘤免疫治疗领域的各种细胞疗法(特别是CAR-T疗法)都无法避免地依赖于该类肿瘤抗原(如目前CAR-T治疗中运用的最成功的CD19)，即肿瘤免疫治疗的靶点。但目前发现的可资利用的这类抗原极其有限，且大多数在正常细胞上也低量表达，在应用时往往引起CAR-T细胞对正常细胞/器官的攻击，导致自身免疫症状，会产生严重副作用。因此，目前该领域正在着力运用二代测序技术寻找更多的新抗原。此外，即使找到这类新抗原，CAR-T治疗的个体化细胞生产也因高昂的成本和潜在的新癌化风险严重阻碍其应用，因此不得不诉诸通用型T细胞的创制。但通用型T细胞也并非完全通用，而仅仅是一种可用于罹患某种同一类型抗原型肿瘤患者的T细胞，对于不同抗原型的肿瘤，仍需制备其特异的T细胞。尽管如此，该类通用型CAR-T的研制，仍代表了肿瘤免疫疗法最新的实用化探索。因此，医学界正努力实现通用型T细胞的研制和临床应用，并已取得显著进展。例如，最近(2017年3月)美国FDA已经批准针对肿瘤抗原CD123的通用型CAR-T UCART123(Cellectis)进入临床试验。CD123抗原在急性骨髓性白血病(AML)细胞与母细胞性浆细胞样树突状细胞瘤(BPDCN)细胞上高度表达。这两种疾病都往往在骨髓中发病，且能在短期内威胁到患者的生命。通用型CAR-T UCART123可用于治疗这两种癌症的免疫治疗。必须指出，任何将病人细胞分离出来，进行体外培养、遗传操作等之后，再回输到病人体内的治疗方案，都存在体外操作带来的风险，尤其是遗传操作。因此，鉴于目前肿瘤免疫治疗尚面临的问题，需要开发新的肿瘤免疫治疗策略和技术。