[发明专利]制备用于检测半胱氨酸的荧光探针的方法

说明书

本发明涉及制备用于检测半胱氨酸的荧光探针的方法。本发明方法所制备的探针可以与半胱氨酸作用，且具有高灵敏性和选择性的特点，可在半胱氨酸高灵敏性和高选择性的识别中应用，或者其可测定样品中半胱氨酸的浓度。

技术领域

本发明涉及制备用于检测半胱氨酸的荧光探针的方法。本发明所制备的探针可以与半胱氨酸作用，且具有高灵敏性和选择性的特点，可在半胱氨酸高灵敏性和高选择性的识别中应用，或者其可测定样品中半胱氨酸的浓度。

背景技术

硫醇的种类有很多种，但小分子生物硫醇有三种，分别为同型半胱氨酸、谷胱甘肽和半胱氨酸。而其中半胱氨酸存在于生物组织细胞的很多小分子和蛋白质中，是组成它们的重要物质，并且半胱氨酸在哺乳动物调节系统调节多种生理和病理过程中起着相当重要的作用，主要是通过半胱氨酸的还原性特质能够被氧化为氧化性的物质维持细胞环境中的氧化还原平衡。同型半胱氨酸在生物体中起着重要的作用，它是甲硫氨酸在一些反应中的中间产物，一旦形成后有两种去路，一是重新转化为甲硫氨酸，二是在一些物质的催化下形成半胱氨酸。谷胱甘肽，是人体中最丰富的非蛋白巯基，在细胞内有许多的功能，包括解毒自由基和过氧化物,调节细胞生长和蛋白质的功能,和维护免疫功能，所以，谷胱甘肽的浓度可以作为评估氧化还原状态和在生物解毒状态在有机体中地位的指标。但半胱氨酸在人体中是起着至关重要的氨基酸之一，它可以改变蛋白质分子之间的二硫键来减弱蛋白质空间结构，从而使蛋白质能够伸展开来。另外半胱氨酸还具有解毒、抗衰老、改变炎症以及预防治疗放射性疾病。大量调查表明，超出正常水平的生物硫醇已被证明与人类疾病的产生有关，如缓慢生长、肝受损和皮肤受损。半胱氨酸不足会导致许多疾病,包括生长阻滞、肝损坏、嗜睡、肌肉软弱和脂肪损失。人类血液中高浓度的同型半胱氨酸是造成神经管效果、骨质疏松症和炎症性肠病等疾病的危险因素。

目前，用来定量检测半胱氨酸的方法多种多样，主要方法包括：滴定方法、紫外吸收法、分子荧光分析法、发射光谱分析法、质谱分析法等。几种方法相比之下，利用分子荧光分析的荧光探针有着明显的优势，包括高选择性、具有高灵敏度、能够快速反应、及时检测、细胞成像等。目前用来检测半胱氨酸的探针有很多，但是比率型近红外的荧光探针且能够进行生物成像的很少。

另一方面，比率型荧光探针能够利用相邻的两个峰之间的增减值来减轻周围环境对半胱氨酸检测的影响，所以具有更大的实用价值。

综上，制备能够检测半胱氨酸的比率型近红外荧光探针是十分有意义的。

发明内容

本领域急需制备一种高灵敏性和高选择性比率型测定半胱氨酸的方法，从而能够有效检测特别是能够在样本中检测半胱氨酸。为此，本发明提出了制备一种新颖的检测半胱氨酸的方法，其所述探针可直接使用，不需要做进一步有机合成修饰，并能够高灵敏和高选择性比率型识别半胱氨酸。本发明涉及的探针可对半胱氨酸的进行高灵敏性和高选择性测定。

具体而言，本发明提供了制备用于检测半胱氨酸的荧光探针的方法，其制备方式如下：

其中：R₁，R₂，R₃，R₄，R₅，R₆，R₇，R₈，R₉，R₁₀，R₁₁，R₁₂和R₁₃为独立地选自由氢原子、直链或支链烷基、直链或支链烷氧基、磺酸基、酯基和羟基组成的组；且其中的R₁，R₂，R₃，R₄，R₅，R₆，R₇，R₈，R₉，R₁₀，R₁₁，R₁₂和R₁₃可以相同或不同。