[发明专利]用于肝癌切除术后预后的双抗体联合荧光检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于肝癌切除术后预后的双抗体联合荧光检测试剂盒。本发明所述的用于肝癌切除术后预后的双抗体联合荧光检测试剂盒包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体是选自对于以下蛋白分子标记物的抗体组合：CD68(细胞分化抗原68)，PD‑L1(程序性死亡配体1)。本发明所述的试剂盒采用双抗体结合指标，可以更加精确地反映组织中PD‑L1的表达模式，从而更好地评估患者的预后，帮助医生选择合适的治疗人群和方式，从而为有效诊治提供更加有力的支持。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于肝癌切除术后预后的双抗体联合荧光检测试剂盒，具体涉及一种用于检测肝癌组织中PD-L1分子表达模式的双抗体联合荧光检测试剂盒。

背景技术

原发性肝细胞肝癌(以下简称为肝癌)是我国最常见和预后最差的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居恶性肿瘤的前列。目前治疗肝癌最有效的方法仍是手术切除和肝移植；然而多数患者在确诊时已处于中晚期，不具备手术的指征和条件，加上术后的高复发率，导致肝癌的总体五年生存率仍处于较低水平。近年来的大量临床试验证明，阻断PD-L1/PD-1共抑制信号通路的免疫治疗方法能延长部分晚期肿瘤(包括肝癌)患者的生存，并显示出持久的疗效。同时，新近的临床研究还发现，当肿瘤中存在肿瘤细胞表达PD-L1时，患者能够对治疗具有更好的应答。值得注意的是也有临床研究显示肿瘤中的免疫细胞PD-L1表达时，患者对治疗的响应率更高。然而，目前临床上对PD-L1表达评估方法采用传统免疫组化染色，难以区分肿瘤细胞和免疫细胞的表达情况，因此用于疗效判断的能力有限。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测肝癌组织中PD-L1分子表达模式的双抗体联合荧光检测试剂盒，它采用双抗体结合指标，可以更加精确地反映组织中PD-L1的表达模式，从而更好地评估患者的预后，帮助医生选择合适的治疗人群和方式，从而为有效诊治提供更加有力的支持。

本发明所述的用于肝癌切除术后预后的双抗体联合荧光检测试剂盒，包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体包括用于检测以下两个蛋白分子标记物的抗体：CD68(细胞分化抗原68)，PD-L1(程序性死亡配体1)；还包括TSA(酪胺信号放大试剂)。

根据本发明所述的双抗体联合荧光检测试剂盒的进一步特征，所述第二抗体是辣根过氧化物酶标记的第二抗体。

通过本发明所述的用于肝癌切除术后预后的双抗体联合荧光检测试剂盒，能综合分析上述两种第一抗体所特异性标记的抗原在肝癌标本中的表达水平，达到评估组织中PD-L1的表达模式和水平的目的。

本发明所述的用于肝癌切除术后预后的双抗体联合荧光检测试剂盒的检测原理是：

首先，利用基于免疫组织化学技术的酪胺信号放大技术检测PD-L1和CD68两种分子标记物在肝癌切除术患者石蜡切片肿瘤区域中的表达情况。

然后，利用专业图像分析软件分析PD-L1在肝癌癌巢组织中的表达模式：分别采用PD-L1与CD68分子双阳性信号占CD68分子的单阳性信号的比例大于等于5％为巨噬细胞PD-L1阳性的阈值；PD-L1阳性与CD68阴性占总体PD-L1表达的比例大于等于5％为肿瘤细胞PD-L1阳性的阈值。并以此阈值对样本进行“阳性”与“阴性”的分组。

最后，在453例接受原发性肝癌切除术患者中，通过生存分析，可获得肿瘤细胞或者巨噬细胞表达与不表达PD-L1两组患者的总体生存率都具有显著差异(P<0.05)。

本发明所述的用于肝癌切除术后预后的双抗体联合荧光检测试剂盒具有以下优点：

(1)试验方法非常成熟，检测过程简便，直观，易于重复，由普通技术员即可完成。

(2)采用免疫多标技术便于客观准确地区分表达PD-L1的细胞类型，优于传统免疫组织化学技术的检测手段。

附图说明