[发明专利]基于POCT模式的MTHFR(C677T)基因型快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测MTHFR(C677T)基因多态性的引物对，其特征在于，检测MTHFR(C677T)基因的引物对包括：

MTHFR(C677T)上游引物:5’-CATCCCTATTGGCAGGTTAC-3’；

MTHFR(C677T)下游引物:5’-TGTGTCAGCCTCAAAGAAAA-3’。

2.与权利要求1所述引物对配套使用的探针组合，其特征在于，所述探针组合包括：

MTHFR(C677T)野生型探针:5’-FAM-AATCGGCTCCCGCA-MGB-3’；

MTHFR(C677T)突变型探针:5’-Teaxs Red-AAATCGACTCCCGCA-MGB-3’。

3.根据权利要求2所述的探针组合，其特征在于，所述探针组合包括：

MTHFR(C677T)野生型探针:5’-FAM-AATC+GGCTCCCGCA-MGB-3’；

MTHFR(C677T)突变型探针:5’-Teaxs Red-AAATCG+ACTCCCGCA-MGB-3’；

其中，“+”表示右侧的单碱基为LNA修饰。

4.含有权利要求1所述引物对和权利要求2或3所述探针组合的检测试剂或试剂盒。

5.一种检测MTHFR(C677T)基因多态性的PCR反应液，其特征在于，所述PCR反应液包括权利要求1所述的引物对与权利要求2或3所述的探针组合。

6.根据权利要求5所述的PCR反应液，其特征在于，所述PCR反应液还包括DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液、MgCl₂和细胞裂解液。

7.根据权利要求6所述的PCR反应液，其特征在于，所述PCR反应液中各组分的终浓度为：0.5-1.5×PCR反应缓冲液、DNA聚合酶0.04-0.1U/μL、dNTPs 0.1-0.5mM、上游引物0.2-0.7μM、下游引物0.2-0.7μM、野生型探针0.2-0.7μM、突变型探针0.2-0.7μM、Mg²⁺1-2.5mM和1×细胞裂解液；

所述细胞裂解液由十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚组成；

其中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.0005-0.015％(w/v)；聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.001-0.03％(w/v)。

8.根据权利要求7所述的PCR反应液，其特征在于，所述PCR反应体系中各组分的终浓度为：1.1×PCR反应缓冲液、DNA聚合酶0.05U/μL、dNTPs 0.2mM、上游引物0.4-0.6μM、下游引物0.4-0.6μM、野生型探针0.4-0.6μM、突变型探针0.4-0.6μM、Mg²⁺2.5mM和1×细胞裂解液。

9.基于POCT模式的MTHFR(C677T)基因型快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求6-7任一所述的PCR反应液。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒进行荧光定量PCR时，其工作程序为：95℃预变性5min；95℃变性8s，63℃退火及延伸35s，循环50次。