[发明专利]阻断型PD-L1驼源单域抗体及其用途

说明书

本发明涉及一种驼源单域抗体，该抗体特异识别程序性死亡受体-配体1(PD-L1)，能够有效阻断PD-L1与其受体PD-1的相互作用，其阻断效果优于上市的阿特珠单抗。具体来说，本发明公布了一种PD-L1驼源单域抗体及其衍生蛋白的编码序列、制备方法和用途。

技术领域

本发明涉及生物医学或生物制药技术领域，更具体地涉及一种抗PD-L1的驼源单域抗体及其应用。

背景技术

肿瘤免疫逃逸是肿瘤细胞通过自身或微环境的改变来逃避集体的免疫识别和攻击。肿瘤免疫治疗因其损伤小且能有效控制肿瘤生长和转移等优势，成为临床肿瘤治疗的迫切需要。程序性死亡因子1/程序性死亡因子1配体1(PD-1/PD-L1)作为一对负性免疫共刺激分子参与了肿瘤免疫逃逸。PD-1/PD-L1是CD28/B7协同刺激分子超家族的新成员，可以介导负性协同刺激信号，能有效抑制T、B细胞功能和增殖，同时减少细胞因子IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌，该抑制途径参与的免疫调节在肿瘤免疫、移植免疫、病毒感染、自身免疫等疾病的研究中都具有重要意义。

程序性死亡因子1配体1(programmeddeath1ligand1，PD-L1)又称CD274，是B7家族成员。PD-L1属于I型跨膜蛋白，分子量约为30-35KD。其受体PD-1是免疫球蛋白B7-CD28家族成员之一，由胞外段、疏水性跨膜区、胞内段组成，其胞内段含有免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif，ITIM)、免疫受体酪氨酸转换基序(immunoreceptortyrosine-basedswitchmotif，ITSM)。其中，ITSM的激活与效应性T细胞应答活性密切相关。PD-1可表达于活化的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、B细胞、自然杀伤T细胞、单核细胞和树突状细胞上。另外，PD-1也表达于调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)，并能促进Treg细胞的增殖，抑制免疫应答。人PD-L1分子可组成性表达于胎盘、心、肝、肺、肾、骨骼肌和部分造血细胞等非淋巴组织，在胸腺、淋巴结和脾脏等淋巴组织中也有适度表达。此外，PD-L1在肺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌等癌组织细胞上也具有表达，且癌组织经过诱导亦可上调其表达。在健康的机体中，PD-1/PD-L1信号通路的激活可最大程度减少免疫反应对周围组织的损伤，避免发生自身免疫疾病。然而，PD-1/PD-L1信号通路激活改变肿瘤局部微环境使得T细胞免疫效应降低，从而介导肿瘤免疫逃逸，促进肿瘤生长。PD-L1在肿瘤上的表达与食管癌、胰腺癌和其它类型的癌症的生存率下降相关，突出了该通路可以作为新的有前途的肿瘤免疫治疗靶点，并以得到诸多实验证实。

单域抗体作为一种新型的小分子抗体片段，由驼类天然的重链抗体重链可变区(VHH)克隆获得。单域抗体的分子量仅有12-15KD，是常规单克隆抗体的十分之一，尺寸只有2-4nM，因此也被称作纳米抗体(Nanobody，Nb)。单域抗体具有优良的生物学特性，不仅拥有完整的抗原结合位点，还能够克服天然抗体分子量大的弊端，具有很好的组织穿透性，特异性高，水溶性好。因其特殊的结构性质，兼具了传统抗体与小分子药物的优势，几乎避免了传统抗体的开发周期长，稳定性较低，保存条件苛刻等缺陷，在免疫诊断和治疗中显示出广阔的应用前景。本研究领域仍亟需能与PD-L1结合，且可以阻断PD-L1/PD-1结合的抗体，尤其是抗PD-L1单域抗体。

发明内容

本发明第一方面，提供了一种抗PD-L1单域抗体VHH链的互补决定区CDR，所述VHH链的互补决定区CDR包含：

SEQ ID NO.:5所示的CDR1、SEQ ID NO.:6所示的CDR2，SEQ ID NO.:7所示的CDR3。

本发明第二方面，提供了一种抗PD-L1单域抗体的VHH链，所述VHH链包括框架区FR和本发明第一方面所述的互补决定区CDR。

在另一优选例中，所述的框架区FR选自下组的一种或多种：