[发明专利]一种以平面色谱成分微阵列高通量筛选复杂成分中生物活性成分的方法及其应用

权利要求书

1.一种筛选生物活性成分的方法，其特征在于：包含以下步骤：

S1. 构建反映和记载待筛选样本化学成分差异特征及其色谱行为、且色谱图展距和通道宽度与微孔板阵列格式一致的平面色谱指纹图谱；

S2. 将平面色谱指纹图谱的色谱薄层按微孔板阵列格式划分、剥离、定位洗脱到微孔板的微孔池中，制备成平面色谱成分微阵列样本；

步骤S2中，采用与微孔板阵列格式对应的网格接口板对色谱薄层划分、剥离；定位洗脱采用与微孔板对应的微孔过滤板；所述的网格接口板材料为硬质、有韧性的金属材料；

定位洗脱的步骤为：把剥离并定位于网格接口板中的色谱层推入微孔过滤板的微孔池中，然后将微孔过滤板对齐接受洗脱液的微孔板，采用溶剂把色谱固定相上的色谱成分定位洗脱到微孔板中相应的微孔池中，得到平面色谱成分微阵列样本；

S3.将平面色谱成分特性以阵列方式进行数字化表述；

S4. 将平面色谱成分微阵列样本进行生物活性检测，构建生物活性热点图，选取活性热点阵列单元；

S5. 针对活性热点阵列单元及其毗邻区阵列单元开展质谱分析；

S6. 将微阵列单元活性成分的生物活性强度和质谱准分子离子峰强度这些特有属性的阵列分布作为色谱行为进行关联、耦合、归一化分析，遴选出生物活性成分；

S7. 将平面色谱图、生物活性热点图和活性化合物之间的对应关系量化可比地表达出来，构建“谱-效”相关的平面色谱指纹图谱。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，重复步骤S1～S4，优化平面色谱成分的试验浓度区间，制备具有代表性的调制样品，优化平面色谱的二维色谱溶剂系统，制备优化后的平面色谱成分微阵列样本。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述的待筛选样本为复杂成分提取物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述复杂成分提取物为天然产物。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的天然产物选自陆生动植物、海洋生物或微生物提取物。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述的待筛选样本选自中药复方提取物、人工合成产物或生物工程产物。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的提取物的制备方法为：分别采用Snyder提出的8类溶剂中每类各选至少一种溶剂进行超声提取，合并提取液后，再除溶剂得到复杂成分提取物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的8类溶剂中包含石油醚、乙醇、四氢呋喃、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、苯和水。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的平面色谱选自无支撑基体的平面色谱和/或有支撑基体的平面色谱。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的无支撑基体的平面色谱选自凝胶电泳、聚合物膜电泳、聚合物膜薄层色谱或电泳条带转膜的聚合物膜。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的有支撑基体的平面色谱选自玻璃板基体的制备型硅胶薄层色谱板或铝基薄层色谱硅胶板。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的平面色谱选自铝基薄层色谱硅胶板。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，还包括平面色谱的分离度和浓度分布的考察。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，采用紫外光下观察、碘熏和硫酸-香草醛试剂显色考察平面色谱的分离度和浓度分布。