[发明专利]一种皮米级细胞提取物的制备方法

说明书

本申请属于干细胞技术领域，具体涉及一种皮米级细胞提取物的制备方法。本发明所提供的制备方法，包括：a)将动物组织冷冻固定，切片，得到厚度为2～100μm的薄片；b)将所述薄片和水混合，振荡，得到细胞悬液；c)将所述细胞悬液在4℃～10℃的温度下进行间歇式超声10～15min，离心，得到上清液；d)将所述上清液过滤，收集滤液，得到所述皮米级细胞提取物。通过本发明方法得到的细胞提取物为皮米级细胞提取物，更易于被人体皮肤吸收；而且，该细胞提取物中含有多种活性成分，可促进皮肤损伤细胞的修复，可广泛应用于促进皮肤损伤修复、抗衰老技术领域。

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种皮米级细胞提取物的制备方 法。本申请要求2017年3月20日提交的中国专利(专利申请号为 201710176027.X)的权益，在此将上述申请的全部内容引用并入本文。

背景技术

细胞提取物一般是指细胞培养液的上清液和/或细胞裂解液，其细胞培养 液上清液含有大量的具有多种生物活性的蛋白质、多肽及细胞因子，它们参 与细胞结构的维持运动信息交流以及组织修复与再生，具有较好的抗光老化、 抗氧化、抗皱、美白肌肤、伤口愈合、细胞修复等功效。因此，随着细胞提 取物的应用价值越来越受到人们的关注，如何获得大量的质量稳定可控的细 胞提取物成为人们致力研究的问题。

目前，传统的细胞提取物的制备方法主要为：首先从不同器官来源的极 少量组织中提取出很少的细胞，然后对这些细胞进行扩增培养，当细胞达扩 增至一定数量后才可以进行细胞提取物的提取。整个提取周期常在30天以上， 耗时费力，得到的细胞提取物数量也比较有限。而且，目前大多数提取方法 得到的细胞提取物仅能做到纳米级别，不利于人体吸收，效果不稳定。

发明内容

为了解决现有细胞提取物提取周期长、数量稀少和分子量大等技术问题， 本发明的目的在于提供一种皮米级细胞提取物的制备方法。

本发明的具体技术方案如下：

一种皮米级细胞提取物的制备方法，包括以下步骤：

a)将动物组织冷冻固定，切成厚度为2～100μm的薄片；

b)将所述薄片和水混合，振荡，得到细胞悬液；

c)将所述细胞悬液在4℃～10℃的温度下进行间歇式超声10～15min，离 心，得到上清液；

d)将所述上清液过滤，收集滤液，得到所述皮米级细胞提取物。

优选的，所述皮米级细胞提取物的分子量在100K以下。

优选的，在步骤b)和步骤c)之间还包括：将所述细胞悬液在4℃下冷 藏1h，使得所述间歇超声的温度维持在4℃～10℃。

优选的，所述间歇式超声的超声波频率为15～25kHz，超声时间为 10～15min。

优选的，所述间歇式超声为：首先超声30～50s，然后停止超声50s，接着 继续超声，如此重复10个循环。

优选的，步骤b)所述振荡的温度为3～5℃，时间为1～2h。

优选的，所述间歇式超声在超声波细胞粉碎仪中进行；

所述超声波细胞粉碎仪的超声波振动棒浸入所述组织悬液中，其底部与 所述组织悬液的底部存在预置距离；

所述预置距离为3～4cm。

优选的，步骤c)所述离心为：在5500～6500rpm下离心30～40min；

步骤a)所述冷冻固定的温度为-85℃，时间为2h。

优选的，所述动物组织为来源于大脑、心脏、肝脏、肺、胃粘膜、肠粘 膜、卵巢、肌肉或骨骼的新鲜组织。