[发明专利]一种骆驼源性成分定量检测的双重数字PCR方法

说明书

本发明提供了一种骆驼源性成分定量检测的双重数字PCR方法，其采用双通道检测法，利用数字PCR系统同时探测骆驼特异性物种基因和高等动物特异性基因两种荧光信号，将骆驼特异性物种基因和高等动物特异性基因序列检测的探针分别标记为FAM和VIC，通过在同一PCR反应体系中测得的骆驼特异性物种基因和高等动物特异性基因序列的拷贝数，计算得到骆驼源性成分占高等动物源性成分的相对含量。本方法可对肉制食品和/或饲料中的骆驼源性成分占总肉源性成分的拷贝数比例进行相对定量。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，具体涉及一种对骆驼源性成分进行定量检测的双重数字PCR方法。

背景技术

2013年初席卷欧洲的“马肉风波”将食品中动物源性成分掺假推向了风口浪尖，经济利益驱动的食品掺假(economically motivated adulteration,EMA)成为了全球共同面临的食品安全热点问题。肉制食品中含有配料表无标识的肉类成分，成为EMA最为主要的类型之一。“马肉风波”中法国、德国、意大利等欧盟16个国家的牛肉产品都含有未经标识的马肉成分。南非官方调查发现一些牛、羊肉制品中包括水牛肉、驴肉，甚至袋鼠肉、长颈鹿肉、斑马肉等。我国在查处“问题羊肉”时也发现掺假羊肉涉及骆驼、狐狸、水貂、老鼠等动物肉。

骆驼是大型养殖动物，单匹骆驼的产肉量十分可观。除用于货物运输以外，骆驼在世界各地都是常见的肉食动物。骆驼肉的风味、质地、色泽与牛肉相近，国内外均发生过屠宰的养殖骆驼或猎杀的野生骆驼伪充牛肉进入食品消费领域的案例。尤其是非洲野生骆驼遭猎杀后，以走私途径非法进入我国，以极低的价格冒充进口牛肉，被不明真相的食品企业作为加工原料采购，对消费者造成极大的食用安全隐患。此外，骆驼屠宰后剩余的骨、肉、头、内脏等部分也存在非法流向高蛋白饲料加工行业的潜在可能。

为保障食品和饲料安全，维护公平合法贸易，需建立食品和饲料中骆驼源性成分的定量测定方法，对肉制食品和饲料中的骆驼源性成分进行精准检测，为执法监管和相关行业自律提供准确可靠的技术依据。

目前，食品和饲料中骆驼源性成分检测局限于实时荧光PCR、普通PCR、琼脂糖凝胶电泳等分子生物学检测技术，未见能够满足行业需要的定量检测方法。

发明内容

本发明的目的在于针对以上要解决的缺点与不足，提供一种骆驼源性成分定量检测的双重数字PCR方法，通过同时检测骆驼和高等动物源性成分基因组单拷贝的双重数字PCR方法，可对肉制食品和/或饲料中的骆驼源性成分占总肉源性成分的拷贝数比例进行相对定量。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种骆驼源性成分定量检测的双重数字PCR方法，其采用双通道检测法，利用数字PCR系统同时探测骆驼特异性物种基因和高等动物特异性基因两种荧光信号，将骆驼特异性物种基因和高等动物特异性基因序列检测的探针分别标记为FAM和VIC，通过在同一PCR反应体系中测得的骆驼特异性物种基因和高等动物特异性基因序列的拷贝数，计算得到骆驼源性成分占高等动物源性成分的相对含量。

优选地，本发明的方法包括以下步骤：

(1)提取含有骆驼源性成分的肉制品的动物组织基因组DNA；

(2)配制数字PCR反应体系；

(3)进行数字PCR反应；

(4)读取和分析数字PCR反应结果；

(5)计算所述骆驼源性成分占总肉成分的相对含量

骆驼源性成分占总肉成分的相对含量

其中A为骆驼特异性基因拷贝数浓度，B为高等动物特异性基因拷贝数浓度；

优选地，所述数字PCR反应包括但不限于微滴数字PCR反应和芯片数字PCR反应。