[发明专利]重组三价腺病毒疫苗及其构建方法

说明书

本发明公开了一种重组三价腺病毒疫苗及其构建方法。该重组三价腺病毒疫苗以E3区缺失的人3型腺病毒为基础，以人7型腺病毒的六邻体高变区的中和表位氨基酸的编码片段替换人3型腺病毒中对应的编码片段，并在原缺失的E3区重组入有人55型腺病毒的六邻体全长基因。该重组三价腺病毒疫苗可以诱导小鼠产生较高滴度的抗AD3、AD7、AD55病毒中和抗体，在体内小鼠免疫攻毒保护试验中，该疫苗可以显著保护小鼠遭受严重的AD3、AD7、AD55共三种人腺病毒的感染，明显降低甚至完全清除肺部病毒载量，说明该疫苗候选株具有三价疫苗保护特性。由于该三价疫苗候选株为单一重组腺病毒，免疫原性强，无体内重组风险。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其是涉及一种重组三价腺病毒疫苗及其构建方法。

背景技术

腺病毒(Adenovirus，Ad)最早由Hilleman M.R.等人于1954年从手术切除的急性呼吸道疾病患儿腺体和扁桃体中发现，至今已分离出52种不同血清型的人类腺病毒，根据不同的免疫学、生物和生化特性还可分为7个亚群(A-G)。腺病毒常引起老人和儿童严重的急性呼吸道感染，也是幼儿腹泻的重要原因。近年来(2009-2012年)，根据广州呼吸道传染病监测平台数据显示，在4242例儿科(小于15岁)急性呼吸道感染病例中，腺病毒感染在呼吸道病毒感染中占比9％，其中在小于两岁的幼儿中占4.6％。B组人3、7、14、55、11型及E组4型腺病毒是严重的呼吸道疾病如急性呼吸道感染和婴幼儿致死性肺炎的重要病原体，传染性强，在国内外多有报道。

腺病毒致病的广泛性和危害的严重性使得腺病毒的防治显得十分重要。接种腺病毒疫苗是预防腺病毒感染最有效的方法之一。然而现时腺病毒疫苗生产工艺，主要是基于腺病毒灭活或者减毒活疫苗的简单混合型，容易使疫苗在人体内出现基因重组而产生新的病毒继而威胁人类健康，而基因工程亚单位疫苗由于其表达的短肽或者病毒单一结构蛋白又难以有效诱导机体产生足够高滴度的中和抗体来保护人们抵御病毒感染。目前国际上人腺病毒疫苗只有人4型、7型腺病毒疫苗，这两种疫苗为活的口服肠溶型疫苗，仅在美国军队的新兵训练营中使用，其应用显著减少了美军发热性呼吸道感染的发病率。由于腺病毒产生的中和抗体只能中和同型腺病毒的感染，不同型别腺病毒抗体之间无交叉保护作用，因此，构建一种能同时预防多种高致病腺病毒的疫苗是目前临床救治和科研生产最需要的。

发明内容

基于此，有必要提供一种重组三价腺病毒疫苗及其构建方法。

一种重组三价腺病毒疫苗的构建方法，包括如下步骤：

步骤S1：将人7型腺病毒六邻体高变区的中和表位氨基酸的编码片段克隆入E3区缺失的人3型腺病毒全基因组载体的六邻体高变区以替换掉对应的编码片段，得到嵌合7型腺病毒表位的重组3型腺病毒载体；

步骤S2：在嵌合7型腺病毒表位的重组3型腺病毒载体的原E3区位置重组入人55型腺病毒的六邻体蛋白的全长编码片段，即得。

在其中一个实施例中，在所述步骤S1中，还包括步骤S11：比对人7型腺病毒与3型腺病毒的六邻体氨基酸序列，并根据同源建模的方法获取所述人7型腺病毒六邻体高变区的中和表位氨基酸的序列。

在其中一个实施例中，获取的所述人7型腺病毒六邻体高变区的中和表位氨基酸的序列如SEQ ID NO.11所示，被替换掉的所述人3型腺病毒全基因组载体中对应的编码片段编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。

在其中一个实施例中，与SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列对应的编码片段的序列如SEQ ID NO.12所示，与SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列对应的编码片段的序列如SEQ IDNO.10所示。

在其中一个实施例中，所述全长人55型腺病毒的六邻体蛋白的编码序列如SEQ IDNO.40所示。

在其中一个实施例中，在所述步骤S1中，还包括如下步骤：