[发明专利]利用乙酸和丙酸生产聚羟基脂肪酸酯的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.制备用于生产P3HB的工程菌的方法，包括如下步骤：提高受体菌中乙酸激酶、磷酸转乙酰酶、聚羟基脂肪酸酯合成酶、β-酮硫解酶和乙酰乙酰辅酶A还原酶的表达和/或活性，从而获得用于生产P3HB的工程菌；

所述工程菌只有用含有乙酸的培养基培养，才可以生产P3HB；

所述乙酸激酶，为如下a1）或a2）：

a1）氨基酸序列是序列表中序列8所示的蛋白质；

a2）在序列表中序列8所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述磷酸转乙酰酶，为如下b1）或b2）：

b1）氨基酸序列是序列表中序列9所示的蛋白质；

b2）在序列表中序列9所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述聚羟基脂肪酸酯合成酶，为如下c1）或c2）：

c1）氨基酸序列是序列表中序列10所示的蛋白质；

c2）在序列表中序列10所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述β-酮硫解酶，为如下d1）或d2）：

d1）氨基酸序列是序列表中序列11所示的蛋白质；

d2）在序列表中序列11所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述乙酰乙酰辅酶A还原酶，为如下e1）或e2）：

e1）氨基酸序列是序列表中序列12所示的蛋白质；

e2）在序列表中序列12所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述受体菌为大肠杆菌E.coli JM109。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述提高受体菌中乙酸激酶、磷酸转乙酰酶、聚羟基脂肪酸酯合成酶、β-酮硫解酶和乙酰乙酰辅酶A还原酶的表达和/或活性是通过向所述受体菌中导入乙酸激酶的编码基因、磷酸转乙酰酶的编码基因、聚羟基脂肪酸酯合成酶的编码基因、β-酮硫解酶的编码基因、乙酰乙酰辅酶A还原酶的编码基因来实现的。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述乙酸激酶的编码基因为如下A1）或A2）所示的DNA分子：

A1）编码区是序列表中序列1自5’末端起第70-1272位所示的DNA分子；

A2）核苷酸序列是序列表中序列1自5’末端起第70-1272位所示的DNA分子；

所述磷酸转乙酰酶的编码基因为如下B1）或B2）所示的DNA分子：

B1）编码区是序列表中序列1自5’末端起第1347-3491位所示的DNA分子；

B2）核苷酸序列是序列表中序列1自5’末端起第1347-3491位所示的DNA分子；

所述聚羟基脂肪酸酯合成酶的编码基因为如下C1）或C2）所示的DNA分子：

C1）编码区是序列表中序列2自5’末端起第70-1839位所示的DNA分子；

C2）核苷酸序列是序列表中序列2自5’末端起第70-1839位所示的DNA分子；

所述β-酮硫解酶的编码基因为如下D1）或D2）所示的DNA分子：

D1）编码区是序列表中序列2自5’末端起第1924-3105位所示的DNA分子；

D2）核苷酸序列是序列表中序列2自5’末端起第1924-3105位所示的DNA分子；

所述乙酰乙酰辅酶A还原酶的编码基因为如下E1）或E2）所示的DNA分子：

E1）编码区是序列表中序列2自5’末端起第3180-3920位所示的DNA分子；

E2）核苷酸序列是序列表中序列2自5’末端起第3180-3920位所示的DNA分子。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述乙酸激酶的编码基因和磷酸转乙酰酶的编码基因是通过序列表中序列1所示的DNA分子导入所述受体菌中的；

所述聚羟基脂肪酸酯合成酶的编码基因、所述β-酮硫解酶的编码基因和所述乙酰乙酰辅酶A还原酶的编码基因是通过序列表中序列2所示的DNA分子导入所述受体菌中的。

5.由权利要求1至4中任一所述的方法制备得到的用于生产P3HB的工程菌。

6.权利要求5所述工程菌在生产P3HB中的应用。