[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因修饰的重组蛋白及其应用

说明书

本发明公开一种猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因修饰的重组蛋白及其应用，密码子优化的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白编码基因，是如下(1)～(3)中的任一种DNA分子：(1)由序列表中SEQ ID NO.3所示的DNA分子；(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的DNA分子；(3)与(1)限定的DNA序列至少具有90％同源性且编码猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的DNA分子。本发明首次通过删除跨膜区基因片段和大肠杆菌偏嗜性密码子基因修饰，人工合成基因片段，构建了原核表达载体，成功获得高效表达的GP5重组蛋白，兔体免疫试验证明，该蛋白具有较好免疫特性。

技术领域

本发明属于动物医学技术领域，具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因修饰的重组蛋白及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRSV引起的致妊娠母猪早产、流产、产死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸困难的传染病。本病最早暴发于美国，目前呈世界范围内流行，给全球养猪业造成了巨大的经济损失。

PRRSV属动脉炎病毒科,为单股正链RNA病毒,基因组大小约为15 kb，根据基因型可分为以LV毒株为代表的欧洲型和以VR2332为代表的美洲型，我国主要流行株为美洲型。PRRSV有9个不分节段的开放阅读框，编码多种非结构蛋白和8个结构蛋白，其中GP5和M蛋白是病毒的主要结构蛋白，GP5蛋白又称为E蛋白，由ORF5编码，是一种跨膜糖蛋白，位于病毒粒子的包膜上，为糖基化的囊膜蛋白。GP5蛋白具有较好的免疫原性，可诱导产生中和抗体，能在体外中和病毒的感染性，动物机体在中和抗体出现之后，抗血清主要识别GP5蛋白。

本研究将高致病性PRRSVBB0907毒株，在分析GP5抗原性、信号肽及跨膜区等特性基础上，首次通过删除跨膜区基因片段和大肠杆菌偏嗜性密码子基因修饰，人工合成基因片段，构建了原核表达载体，成功获得高效表达的GP5重组蛋白，兔体免疫试验证明，该蛋白具有较好免疫特性。成功建立间接ELISA抗体检测方法用于PRRSV抗体检测，该方法特异性和敏感性均达90%以上，与IDEXX公司PRRSV ELISA抗体检测试剂盒符合率为91.567%，具有重要应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种密码子优化的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白编码基因及其应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种密码子优化的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白编码基因，是如下(1)~(3)中的任一种DNA分子：

(1) 由序列表中SEQ ID NO.3所示的DNA分子；

(2) 在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的DNA分子；

(3) 与(1)限定的DNA序列至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的DNA分子。

含有上述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

上述重组载体为将所述的编码基因插入原核表达载体得到的载体；所述原核表达载体具体为大肠杆菌表达质粒pET-28a（+）。

上述重组菌为将所述重组载体导入目的菌中得到的重组菌，所述目的菌具体为大肠杆菌；所述的大肠杆菌进一步具体为大肠杆菌BL21。

上述的编码基因或上述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在制备GP5重组蛋白中的应用。

一种制备GP5重组蛋白的方法，为发酵上述的重组菌，收集发酵产物并进行纯化，即得到GP5重组蛋白。