[发明专利]一种靶向性T淋巴细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向性T淋巴细胞，包括靶向EGFRvⅢ的嵌合抗原受体CAR‑EGFRvⅢ和/或靶向IL13Rα2的嵌合抗原受体CAR‑IL13Rα2，CAR‑EGFRvⅢ可以专一性的靶向EGFRvⅢ，CAR‑IL13Rα2可以专一性的靶向IL13Rα2，从而激活T细胞内的信号区，促进T细胞在患者体内的扩增，高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，并且能够有效的抑制肿瘤细胞逃逸的发生，更好的维持细胞的活力和杀伤力。本发明还提供了该靶向性T淋巴细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向性T淋巴细胞及其制备方法和应用。

背景技术

胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，起源于神经胶质细胞。胶质瘤约占所有原发性神经系统肿瘤的60％，具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低的“三高一低”的特点。目前，采用的外科手术、化疗等传统疗法并未明显的改善胶质瘤患者的预后。

近年来，过继性细胞免疫治疗被认为是现有科技中有可能彻底清除癌细胞的方法。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)作为当前最新的免疫细胞技术之一，因其能够表达特异性受体靶向识别特异性的细胞如肿瘤细胞，受到广泛的关注和研究，也是肿瘤免疫治疗的研究中最为活跃的方向。CAR-T的肿瘤识别蛋白为人工设计的跨膜信号蛋白，CAR-T免疫细胞是应用基因修饰病人自体的T细胞，利用抗原抗体结合的机制，可以不依赖于主要组织相容性复合体的方式活化淋巴细胞，从而杀伤肿瘤。CAR-T免疫细胞因抗肿瘤的特异性和靶向性增强，同时杀伤活性和持久性也增强，因此具有非常广阔的应用前景。因此，亟需一种可以用于胶质瘤治疗的嵌合抗原受体T细胞。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向性T淋巴细胞，包括靶向EGFRvⅢ的嵌合抗原受体CAR-EGFRvⅢ和/或靶向IL13Rα2的嵌合抗原受体CAR-IL13Rα2，CAR-EGFRvⅢ可以专一性的靶向EGFRvⅢ，CAR-IL13Rα2可以专一性的靶向IL13Rα2，从而促进T细胞在患者体内的扩增，高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，尤其是表达EGFRvⅢ和/或IL13Rα2的胶质瘤细胞，有效的抑制肿瘤细胞逃逸的发生，更好的维持细胞的活力和杀伤力。本发明还提供了该靶向性T淋巴细胞的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种靶向性T淋巴细胞，包括靶向EGFRvⅢ的嵌合抗原受体CAR-EGFRvⅢ和/或靶向IL13Rα2的嵌合抗原受体CAR-IL13Rα2，其中，所述CAR-EGFRvⅢ包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向EGFRvⅢ的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，所述CAR-IL13Rα2包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向IL13Rα2的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；其中，所述靶向EGFRvⅢ的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向IL13Rα2的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

在本发明中，表皮生长因子受体III型突变体(Epidermal Growth FactorReceptor variant III，EGFRvIII)是表皮生长因子受体(EGFR)的最常见突变体，是EGFR的胞外区的框内缺失突变。EGFRvIII广泛存在于胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌等恶性肿瘤中，并且EGFRvIII仅表达在恶性肿瘤细胞，在正常的组织细胞中不表达，因而成为肿瘤治疗，特别是胶质瘤治疗的理想靶点。

白细胞介素13受体α2(IL13Rα2)在肿瘤细胞，尤其是在胶质瘤细胞中高表达，并且胶质瘤的病理级别越高，其表达越强，而在正常的胶质细胞中不表达IL13Rα2。因此，IL13Rα2可以作为是胶质瘤治疗过程中的重要靶点。