[发明专利]一种烟草基因编辑素材中生物碱的测定方法

权利要求书

1.一种烟草基因编辑素材中生物碱的测定方法，其特征在于，使用以下装置：

样品萃取瓶，包括：外套管(1)，其底部密封且为平底，其口部有一密封圈(11)；内套管(2)，其外径与所述外套管(1)的内径相适配，其的长度大于所述外套管(1)的长度；导液管(4)，位于所述内套管(2)内，其下端有一扩张口与所述内套管(2)的下端内壁密封固定连接，其与所述内套管(2)上端口固定连接形成受压面(21)，其上部伸出所述内套管(2)外部，并回弯向下；筛板(3)，位于所述内套管(2)的下端开口内，为一个或多个；样品萃取架(5)，其内有若干样品萃取瓶放置孔(51)，用于放置所述样品萃取瓶；样品收集架(6)，其内有若干样品瓶放置孔(61)和若干废液收集瓶放置孔(62)，用于放置样品瓶(610)和废液收集瓶(620)；转抽(7)，位于所述样品收集架(6)中心部；所述样品收集架(6)和所述样品萃取架(5)可分别围绕所述转抽(7)旋转；下压板(8)，其表面伸出有若干下压头(81)；

该方法包括以下步骤：

①准确称取0.25g的烟草粉末样品于外套管中，加入25mL的萃取剂，平行处理100个样品；插入内套管并放置在所述样品萃取架(5)上进行超声萃取35min；

②利用转轴进行固定，使所述导液管的管口对准废液收集瓶(620)，下压内套管的受压面(21)并使萃取溶液通过过滤筛板(3)过滤后进入导液管中，从中流出的最初滤液2-3mL进入废液收集瓶(620)中；

③以转轴为中心，转动样品萃取架，使所述导液管的向下回弯管口对准所述样品瓶(610)瓶口，继续下压内套管的受压面(21)，将1-1.5mL样品滤液转移到样品瓶(610)中，冷却至室温得到待分析的样品滤液；

④使用高效液相色谱分析进行测定，采用峰面积法进行定量，对比样品烟草基因编辑素材中生物碱的的的峰面积与标准溶液工作曲线的峰面积法，即可确定烟草基因编辑素材中生物碱的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤①所用的萃取剂为80v/v％乙醇溶液，且其内含0.5wt％的氢氧化钠。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤②所述的过滤筛板(3)的孔径为0.45μm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤④所述的高效液相色谱分析条件如下：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50μm，1.7μm)柱；流速：0.6mL/min；柱温：45℃；流动相：10v/v％的乙腈溶液；进样量：5.0μL；检测波长：259nm。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相中还含有0.1wt％的乙酸铵。