[发明专利]一种玄参茎尖组培苗叶片再生植株组培技术及专用培养基组合

权利要求书

1.一种玄参茎尖组培苗叶片再生植株组培方法，其特征在于：直接用玄参茎尖组培大量获取脱毒的再生苗，对再生苗进行病毒检测后，选取脱毒成功的苗，取其叶片再次进行愈伤诱导、芽苗分化和生根培养，获得叶片再生苗；具体包括如下步骤：

1）取玄参顶芽，去掉多余叶片，洗衣粉水浸泡1min，流水冲洗40min，75%乙醇洗涤1min，无菌水洗1次，1‰升汞消毒4min，无菌水洗涤4次，无菌滤纸吸干水分；剥去细小的叶片，用尖细镊子夹取茎尖0.5-1mm的部分，作为一代繁殖材料；

2)将一代繁殖材料接种到权利要求1所述的茎尖愈伤诱导培养基；25℃，每天光照12h培养； 30-40天，待愈伤长至直径1-2cm时，转入权利要求1所述的茎尖幼苗分化培养基分化幼苗；

3）步骤2）分化出的幼苗长到3cm时，转入权利要求1所述的茎尖壮苗培养基诱导生根；根长出，植株叶片长大增多以后，取部分叶片进行病毒检测，选择脱毒成功的植株，取叶片，剪0.5cm²小片，得到二代繁殖材料；

4）二代繁殖材料接种到权利要求1所述的叶片愈伤诱导培养基，诱导出愈伤后，转入权利要求1所述的叶片幼苗分化培养基；

分化出的小苗转入权利要求1所述的叶片壮苗培养基诱导生根；

5）待根长出后，苗长至7-10cm时，将苗取出，洗干净基部培养基碎渣，栽入珍珠岩与河沙比例为1:1的炼苗基质,前7天每天叶面喷水保湿，15天，苗成活后，移栽大田；

所述专用培养基组合由茎尖培养基组合和组培苗叶片培养基组合组成，二者均包括愈伤诱导培养基、分化培养基和壮苗培养基三种；

茎尖培养基组合如下：

愈伤诱导培养基的配方为：MS培养基+白糖20g/L+琼脂7g/L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1 mg/L；

分化培养基的配方为：MS培养基+白糖20g/L+琼脂7g/L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1 mg/L；

壮苗培养诱导根的配方为：1/2 MS培养基+白糖10g/L+琼脂7g/L；

组培苗叶片培养基如下：

愈伤诱导培养基的配方为：MS培养基+白糖20g/L+琼脂7g/L+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L；

分化培养基的配方为：MS培养基+白糖20g/L+琼脂7g/L+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1 mg/L；

壮苗培养诱导根的配方为：1/2 MS培养基+白糖10g/L+琼脂7g/L。