[发明专利]葡萄糖磷酸异构酶的酶显色定量测定试剂盒及测定方法

说明书

本发明涉及葡萄糖磷酸异构酶的酶显色定量测定试剂盒及测定方法，D‑果糖‑6‑磷酸二钠在葡萄糖磷酸异构酶作用下生成葡萄糖‑6‑磷酸，葡萄糖‑6‑磷酸与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶作用下生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，NADH与水溶性四氮唑盐反应，反应产物在550nm处有最大吸光度，吸光度值与GPI浓度成正比。本发明的葡萄糖磷酸异构酶的酶显色定量测定方法的各项指标均符合临床要求，可用于临床葡萄糖磷酸异构酶含量的检测。

技术领域

本发明涉及葡萄糖磷酸异构酶的酶显色定量测定试剂盒及方法，属于临床检测技术领域。

背景技术

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种病因尚未完全阐明、以侵犯四肢小关节为主的自身免疫性疾病，RA早期即可产生不可逆的骨侵蚀和关节破坏，如果未能得到及时治疗，RA患者在2-3年的致残率约为60％-70％，因此RA的早期诊断及规范化治疗极为重要。探讨其发病机制对于RA的诊治和预防至关重要。

葡萄糖磷酸异构酶(GPI)是一种广泛表达并且具有多种功能的蛋白质，它是能量循环过程和糖分解过程中必不可少的胞浆酶，同时它又作为细胞外信号传导分子。GPI是自分泌运动因子和神经细胞因子，可能在肿瘤和自身免疫方面起着一定的作用。近年研究发现，葡萄糖磷酸异构酶(GPI)可作为自身抗原与自身免疫病尤其是类风湿关节炎密切相关，且与活动期患者的疼痛及肿胀关节数成正相关。研究表明GPI可能通过与抗体复合物激活补体替代途径，诱发关节炎。GPI可诱导C57BL/10小鼠产生关节炎，疾病的发生与Ⅱ型主要组织相容性复合体相关。关于GPI及其抗体在RA中的诊断价值，大多数研究结果表明GPI抗原诊断RA的敏感性＞65％，特异性≥90％，有较高的诊断价值。随着GPI检测项目在临床应用上快速开展，对于检测技术的快速准确和高效提出了新的要求。所以迫切需求一种能快速准确且灵敏度和精密度高的检测葡萄糖磷酸异构酶的方法来满足RA的临床诊断。

中国专利文件CN102323401A公开了一种葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗原体外检测试剂盒，包括检测板、羊抗GPI抗体、胶体金结合物、封闭液、洗涤液、阳性参考品和阴性参考品。采用双抗体夹心胶体金免疫吸附法原理检测人血清中的GPI抗原，将羊抗GPI抗体包被于硝酸纤维素膜，制成固相抗体，用以捕获人外周血清中可能存在的GPI抗原。再将胶体金标记于羊抗GPI抗体，形成胶体金结合物作为示踪物，如被测人血清中含有GPI抗原，则形成固相羊抗GPI抗体-GPI抗原-胶体金结合物。然而，该方法只能检测GPI的蛋白含量，而不能检测其酶活性高低。目前的临床研究证实GPI活性在类风湿关节炎诊断中更具有意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种葡萄糖磷酸异构酶的酶显色定量测定试剂盒及方法。

本发明的技术方案如下：

一种葡萄糖磷酸异构酶的酶显色定量测定试剂盒，包括试剂R₁、试剂R₂和稀释液A；

所述的试剂R₁包括如下组分浓度组成：D-果糖-6-磷酸二钠(F6P)1250-1300mg/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)450-500mg/L，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)4-6mg/L；

所述的试剂R₂包括如下组分浓度组成：水溶性四氮唑盐(WST-3)18-22mg/L，吩嗪硫酸甲酯(PMS)1-3mg/L，壬基酚聚氧乙烯醚(NP-40)990-1010mg/L；

所述的稀释液A包括如下组分组成：Tris 1200-1210mg/L，EDTA·2Na 370-375mg/L，KCl 3720-3730mg/L，MgCl₂ 1015-1020mg/L；

所述的试剂R₁用稀释液A溶解，所述的试剂R₂用水溶解。