[发明专利]一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用

说明书

本发明公开了一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用。一种与ICP辅助诊断相关的血清/血浆miRNA标志物，由miR‑371a‑5p，miR‑6865‑5p和miR‑1182组成。所述的血清/血浆miRNA标志物的引物。所述的引物在制备ICP辅助诊断试剂盒中的应用。发明人通过分离和研究初产、单胎妊娠的ICP病例和与其年龄匹配的健康孕妇对照血清/血浆中的miRNAs，寻找一组与ICP发病高度相关的高特异性和敏感性的miRNAs，并研制出可便于临床应用的ICP辅助诊断试剂盒，为ICP的筛查和诊断治疗提供实验室支持。

发明领域

本发明属于基因工程及生殖医学领域，涉及一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用。

背景技术

妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是一种以瘙痒、血清肝酶和胆汁酸升高为特征的妊娠相关综合征，是妊娠期严重危害母婴健康的并发症。其发病率可高达12.0％，可引起胎儿宫内窘迫、自发性早产、死胎等不良妊娠结局，增加围产儿发病率和死亡率。ICP对妊娠最大的危害是发生难以预测的胎儿突然死亡，围产儿的死亡率约为正常妊娠者的6-10倍。尽管有报道ICP的多种基因和蛋白会发生改变，可能通过细胞凋亡、氧化应激、脂质代谢、细胞生长和免疫应答等途径参与ICP的发生，但迄今为止，ICP的确切原因仍不明确。

对ICP人群进行早期诊断、早期干预及合理治疗可以有效降低该病的发病风险和母婴并发症，大大降低ICP给母婴和其家庭带来的疾病痛苦和经济压力。然而目前临床上ICP的监测手段非常有限，只能依赖于敏感度较低的胆汁酸筛查。因此研究ICP发生的敏感分子事件，进而筛选易感生物标志物(susceptible biomarker)可为ICP的早期诊断和实施干预提供有效手段，对促进人类母婴健康具有重大的科学意义。

MicroRNAs(即miRNAs)是近年来分子生物学研究领域的一个热点，它的成熟状态是一类长约18-24个核苷酸的小非编码单链RNA分子，进化上具有高度保守性。miRNA的主要功能是调节生物体内在的与机体生长、发育、疾病发生过程有关的基因的表达。自从参与调控线虫时序发育的lin-4与let-7被发现以来，miRNA分别在2002年和2003年两度入选Science杂志年度十大科技突破。2005年预测miRNAs至少能调控5300个人类基因，即所有基因的30％。随着研究的深入，越来越多的miRNAs不断被发现。聚光灯下的miRNA已经逐步摆脱了DNA光芒的掩盖，从“配角”变成“主角”，并且对DNA的中心地位提出了新的挑战。近年来，miRNA与疾病的关系已经成为研究的热点和重点，miRNA已被证实可以作为妊娠糖尿病和先兆子痫的诊断和预后标志物。

研究已经证实血清/血浆中存在几百种的miRNAs，这些小分子RNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性。现有的成熟的技术，包括定性和定量miRNA分子的技术，表明利用血清miRNAs作为分子生物标志物的方法比传统的特异蛋白分子标记方法将更加有效，为生物标志物开拓了新境界。

然而，目前还没有用于ICP辅助诊断的较为稳定的生物标志物的报道，若能筛选出ICP特异或异常表达的血清/血浆miRNAs作为生物标志物，并研制相应的辅助诊断试剂盒，将极大改善我国ICP的诊断现状。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述技术问题，提出一种与ICP辅助诊断相关的血清/血浆miRNA标志物。

本发明的第二个目的是提供上述血清/血浆miRNA标志物的引物。

本发明的第三个目的是提供上述血清/血浆miRNA标志物及其引物在制备ICP辅助诊断试剂盒中的应用。

本发明第四个目的是提供用于ICP辅助诊断的试剂盒。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：