[发明专利]一种基于磁珠法的核酸纯化试剂

说明书

本发明涉及一种基于磁珠法的核酸纯化试剂和试剂盒，所述核酸纯化试剂为包含以下质量分数的物质的水溶液：1％～5％羧基修饰磁珠、11.78％～23.56％氯化钠、10％～20％聚乙二醇、0.01％～0.05％N‑月桂酰肌氨酸钠、0.16％～0.79％Tris‑HCl、0.5％～2％EDTA和0.5％～2％吐温20。所述核酸纯化回收试剂盒包括所述核酸纯化试剂、洗涤缓冲液和洗脱缓冲液。本发明的核酸纯化试剂以及试剂盒的核酸的回收效率较现有磁珠试剂以及试剂盒回收效率更高，对于微量样本的回收损耗更低，且对于100bp左右或者更小的核酸片段回收效率更好。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种基于磁珠法的核酸纯化试剂。

背景技术

目前，在生物医学的各个领域都离不开核酸的纯化，许多反应如二代测序、TA克隆等需要将酶反应后的核酸纯化回收，核酸的分离与纯化方法有多种：如有利用DNA和RNA在盐溶液中溶解不同特性以分离两者的浓盐法，有利用有机溶剂将蛋白质变性同时抑制核酸酶降解的有机溶剂抽提法，有利用不同内容物密度不同的原理分离核酸的密度梯度离心，还有利用不同吸附材料(如硅质材料、阴离子交换树脂及磁珠)和核酸结合的特性以获得核酸的吸附材料结合法。磁珠法在外加磁力的作用下，可以快速分离纯化核酸，非常安全并易于自动化。磁珠核酸纯化方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微球为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，而在低盐溶液中将核酸从磁珠表面脱离的原理进行核酸纯化的方法。

现有的基于磁珠法的核酸纯化试剂，核酸回收率只有90％以下，而且只能吸附100bp以上的片段，对于100bp左右的片段损耗非常严重。如果遇到操作体系步骤繁多、待处理样本珍稀取样困难、待处理样本起始量低等问题，如何高效的进行实验过程中核酸纯化回收对于实验操作的结果有至关重要的作用，并且液体活检中的cfDNA这类片段大小很多在100bp左右或以下，现有基于磁珠法的核酸纯化试剂对于这类片段的回收率非常低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种纯化效率更高的更适用于微量样本的且对于DNA小片段分子具有良好回收效率的基于磁珠法的核酸纯化试剂。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种基于磁珠法的核酸纯化试剂，由以下质量分数的各物质组成：1％～5％羧基修饰磁珠、11.78％～23.56％氯化钠、10％～20％聚乙二醇、0.01％～0.05％N-月桂酰肌氨酸钠、0.16％～0.79％mM Tris-HCl、0.5％～2％EDTA和0.5％～2％吐温20，余量为水。所述聚乙二醇的分子量为6000-10000，增强了所述核酸纯化试剂中高盐浓度(主要是氯化钠)主导的纳米磁珠吸附核酸的作用，所述核酸纯化试剂的pH值为7.0。

所述羧基化修饰磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠表面进行了羧基化修饰，采用聚合丙烯酸的方法进行羧基化修饰，直径为600nm～1000nm，具有超顺磁性、快速磁响应性、高羧基含量、单分散性等特点，能够在特殊化学试剂的作用下将多肽、蛋白及寡聚核苷酸等生物配体偶联到微球表面，所述羧基化磁珠为两层磁圈，磁性较大，在外加磁场的作用下，聚拢速度快，聚苯乙烯核仁体积小，质量小，在没有磁场的作用下，沉降速度缓慢，悬浮时间较长，更有效的吸附核酸。

一种基于磁珠法的核酸纯化回收试剂盒，包括所述核酸纯化试剂、洗涤缓冲液和洗脱缓冲液，所述洗涤缓冲液为体积分数为80％的乙醇，所述洗脱缓冲液为TE缓冲液或超纯水。

本发明的有益效果是：本发明的基于磁珠法的核酸纯化试剂及试剂盒对于核酸的回收效率较现有磁珠试剂以及试剂盒回收效率更高，对于微量样本的回收损耗更低，且对于100bp左右或者更小的核酸片段回收效率更好。同时可以通过调整核酸纯化试剂的待处理DNA的体积比，从而达到片段选择效果。

附图说明

图1为本发明实施例1中核酸纯化回收效率图；

图2为本发明实施例2中核酸纯化回收效率图；