[发明专利]一种髓过氧化物酶荧光免疫层析试纸条及试纸卡

说明书

本发明公开了一种髓过氧化物酶荧光免疫层析定量检测试纸条，包括：底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接组装在底板上，其中，吸水垫和结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端，并在硝酸纤维素膜的表面形成检测区；样品垫交叠压在结合垫上，所述结合垫上固定有髓过氧化物酶抗体‑荧光微球复合物；所述检测区内的硝酸纤维素膜上包被有识别髓过氧化物酶另一个表位的单克隆抗体构成的检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。本发明具有高灵敏度、高稳定性，其检测线性为3.125‑600ng/ml，无非特异性，检测时间仅需5min，并且能够实现床旁快检，极大提高了临床诊断效率。

技术领域

本发明属于POCT免疫层析检测技术领域，具体涉及一种髓过氧化物酶荧光免疫层析定量检测试纸条、包含所述试纸条的试纸卡，以及它们的制备方法。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病，简称冠心病（coronary heartdisease,CHD）。目前 CHD已成为全球心血管疾病中发率病最高的疾病。我国有近千万人患CHD，每年约80万人以上死于CHD，已远超肿瘤的致死率，且死亡人数随年龄呈增长趋势。冠心病的产生受多种因素影响，如吸烟、性别(男性多于女性)、基因多态性、地域差异、年龄(多在40岁以上)等。CHD发生发展机制与众多病理因素导致的炎症反应及氧化应激密切相关。目前我国CHD具有高死亡率、高病发率、高负担（社会和家庭）等特点，已成为威胁现代国民健康及生命的首要常见病。

髓过氧化物酶(myelopexoxidase，MPO)是一种白细胞源性血红素辅基的蛋白酶，是炎症和氧化应激的标志物。伴随科研的深入，人们发现它在发挥正常免疫防御作用的同时，还与其他人类疾病的发生发展有关，如炎症、动脉粥样硬化、血管炎、肺癌、大肠癌等。近年来，许多生物标志物已用于临床或正在被研究，旨在预测心血管疾病风险，因动脉粥样硬化和炎症反应之间有密切联系，所以认为炎症标志物可能成为更好的预测动脉粥样硬化的指标。MPO与心血管疾病存在密切联系—MPO被视为一个动脉粥样硬化推动者，通过氧化反应催化产生的产物和酶，促进斑块形成和不稳定性增加，加速动脉粥样硬化进展，进而引起多种并发症，如急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）。动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）又是形成CHD的重要病理基础。血清MPO含量与冠状动脉病变形态相关，也与CHD临床病情严重性相关。在国际实验科研院所中，MPO已被作为预测急性心肌梗死早期指标，其与C反应蛋白检测类似，也作为一种炎症反应指标，其水平变化能够早于心肌缺血改变。MPO水平测定及其在CHD诊断、病情变化及预后评估，扮演极其关键角色。

目前检测髓过氧化物酶的常用方法有：

1、酶联免疫吸附法（ELISA）：酶联免疫吸附测定法是以免疫学反应为基础，将抗原抗体特异性结合与酶底物的高效催化产物作用相结合的一种敏感性很高的检测技术。此法灵敏度高，可达ng/ml的水平，特异性高，几乎不受体液中激活剂、抑制剂的影响，也不受过氧化物酶和血红蛋白干扰。由于成本较高，并且测定时间较长，操作繁琐，对操作人员技术要求高。

2、流式细胞仪测定法：测定中性粒细胞浆中MPO的含量，将全血加入红细胞溶解液中，后使用固定液及细胞膜渗透剂处理细胞，最后加入荧光素标记的抗体MPO单克隆抗体，利用抗原抗体反应对MPO染色，对特定细胞群体进行分析，分析MPO阳性细胞的比例和平均荧光强度。此法特异性强、灵敏度高，但是技术程序复杂，检测需特殊仪器。

3、胶金法(GICA法)：胶体金免疫层析技术特点主要以胶体金作为标记物。能在弱碱条件下，这种带负电荷标记物与抗原抗体分子上的带正电荷基团结合，结合是属于静电结合，不影响生物分子特性。此方法只能定性或者半定量，数据不准确。