[发明专利]一种双标记磁珠时间分辨荧光免疫定量检测cTnI和H-FABP试剂盒

说明书

本发明公开了一种双标记磁珠时间分辨荧光免疫定量检测cTnI和H‑FABP试剂盒，包括包被cTnI单克隆抗体的免疫磁珠、包被H‑FABP单克隆抗体的免疫磁珠、cTnI和H‑FABP的校准品溶液、铕标记的cTnI单克隆抗体溶液和钐标记的H‑FABP单克隆抗体溶液、清洗液和增强液。所述的包被cTnI和H‑FABP免疫磁珠为带有官能团修饰的直径1~3μm的超顺磁珠分别与cTnI、H‑FABP的抗体共价偶联物。本发明的灵敏度高，cTnI的灵敏度为0.05ng/mL，H‑FABP的灵敏度为1ng/mL，血清(浆)样本不需要稀释；检测时间短，30min出报告；样品需求量少，一次上样只需100μL；配套全自动时间分辨免疫分析仪，操作简单，节省人力。

技术领域

本发明涉及体外试剂检测技术领域，具体地说，本发明涉及一种双标记时间分辨荧光免疫磁微粒定量检测cTnI和H-FABP试剂盒。

背景技术

急性心梗(acute myocardial infarction，AMI)近年来在世界范围内发病持续升高，而对AMI的治疗，再灌注治疗的效果与时间呈显著负相关，早期发现AMI对及时、正确治疗非常关键。目前常用诊断AMI的生化指标有肌红蛋白(myoglobin，MYO)、肌钙蛋白(troponin I，cTnI或troponin T，cTnT)和肌酸激酶同工酶(creatine kinasemass，CK-MB)。这些指标对早期诊断AMI的灵敏度或特异性都存在一定的缺陷，MYO半衰期短，峰值到达早，但是特异性差容易受到干扰，得到假阳性的检查结果；CK-MB特异性比较好，但是半衰期相对MYO长，需要更长的时间才能反馈病情，延迟医生的诊断和治疗。cTnI是目前诊断心肌梗死的金标准，但cTnI在心肌受损时释放入血的时间晚，一般也要发病6h后才具备诊断价值。对于AMI患者来讲，时间就是生命，为了实现对胸痛患者的早期识别并进行危险分层，我们需要更快提供准确结果的检测仪器以及更快的心肌损伤早期诊断标志物。

心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid-binding protein，H-FABP)是一种新型的心肌标志物，也是目前国内外研究较多的早期诊断AMI敏感高、特异性高的生化指标。在心肌细胞损伤后，H-FABP可先于心肌肌钙蛋白，迅速被释放进入血液循环。最早在AMI发病后30分钟后，血浆中H-FABP就可被检测到。因此，联合检测H-FABP、cTnI，使H-FABP、cTnI诊断的时间窗口期互补，弥补单项检测的不足，将大大提高AMI诊断率，在AMI早期诊断、疗效观察和预后判断中发挥越来越重要的作用。

为此，本发明将双标记时间分辨荧光免疫分析技术与磁微粒相结合，提供了一种基于磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其制备方法和检测方法，不仅能够同时检测样品中的H-FABP和cTnI含量，而且还保证检测结果更加准确可靠，具有更高的检测灵敏度和特异性，并达到了较佳的性能参数。

发明内容

本发明的目的是提供一种成本低廉、操作简单、准确、灵敏的双标记磁珠时间分辨荧光免疫定量检测cTnI和H-FABP试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种双标记磁珠时间分辨荧光免疫定量检测cTnI和H-FABP试剂盒，包括：包被cTnI单克隆抗体的免疫磁珠、包被H-FABP单克隆抗体的免疫磁珠、cTnI和H-FABP的校准品溶液、铕标记的cTnI单克隆抗体溶液和钐标记的H-FABP单克隆抗体溶液、清洗液和增强液。

在上述双标记磁珠时间分辨荧光免疫定量检测cTnI和H-FABP试剂盒中，所述的包被cTnI和H-FABP免疫磁珠为带有官能团修饰的直径1～3μm的超顺磁珠分别与cTnI、H-FABP的抗体共价偶联物，其中所使用的磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、链酶亲和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、亲水磁珠、疏水磁珠中的一种或几种。