[发明专利]长链非编码RNA PRALR及其表达质粒和用途

说明书

本发明涉及一种长链非编码RNA PRALR及其表达质粒和用途。本发明从TCONS_00013523序列开始，利用5’‑RACE和3’‑RACE技术发现了完整的基因序列，并命名为PRALR(Paclitaxel resistance‑associated lncRNA，紫杉醇耐药相关长链非编码RNA)。然后构建了PRALR的表达质粒及siRNA，进一步证实PRALR为一个新型的卵巢癌耐药相关lncRNA，所构建的PRALR表达质粒能显著提升PRALR表达量，所设计的siRNA能显著逆转耐紫杉醇卵巢癌细胞的耐药性。本发明为紫杉醇耐药和其他化疗药耐药的机制研究提供了有力工具，同时为临床开发逆转肿瘤对紫杉醇耐药性的药物提供了参考。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说，涉及一种卵巢癌耐药相关的长链非编码RNAPRALR及其表达质粒和用途。

背景技术

lncRNA，即长链非编码RNA，是一类长度超过200核苷酸(nt)的RNA分子的总称，它们基本没有编码蛋白的功能，但可以和DNA、RNA及蛋白质结合，广泛参与机体的生理和病理过程，在疾病发生发展和调控方面有重要的作用。

卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，其死亡率位居各妇科恶性肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。早期症状不明显，诊断时已处于晚期，缺乏高效的化疗药物及耐药的产生是主要原因。

近年研究发现lncRNA在卵巢癌的发生、发展中具有重要作用，有望成为新型肿瘤标记物和肿瘤治疗的靶点。借助基因芯片和高通量测序方法等技术，发现与卵巢癌相关的lncRNA有：LSINCT5、XIST、ZNF300P1、AB073614、HOXA11-AS、H19、HOTAIR、PVT1、ANRIL、HOST2、FAL1、MEG3，并且研究表明LSINCT5、XIST、HOTAIR、ANRIL等有望成为卵巢癌预后判断的分子标记物。

《第四军医大学》2015年硕士论文“lncRNA在卵巢癌耐药细胞株中的筛选及作用机制的初探”进行了以下研究：1)以顺铂敏感细胞株A2780、耐药细胞株CP70为研究对象，应用lncRNA基因芯片差异分析、实时荧光定量PCR等观察lncRNA在卵巢癌耐药和非耐药细胞中的表达变化，分析lncRNA基因表达水平变化导致顺铂耐药的分子机制。2)以A2780/CP70细胞为研究对象，应用mRNA基因芯片差异分析、实时荧光定量PCR等观察mRNA在卵巢癌耐药和非耐药细胞中的表达变化，分析mRNA基因表达水平变化与顺铂耐药的相关性。3)生物信息学分析比对lncRNA基因芯片与mRNA基因芯片差异表达基因，遴选特异的lncRNA。4)应用实时荧光定量PCR验证特异的lncRNA与mRNA表达水平相关性，分析lncRNA在参与顺铂耐药过程中可能的耐药机制。5)以顺铂耐药细胞株CP70为研究对象，应用siRNA技术沉默相关lncRNA基因，实时荧光定量PCR观察转染后特异基因的表达，MTT法观察特异lncRNA的siRNA对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响，并分析其内在的分子机制。最后得出以下结论：lncRNA参与顺铂耐药的发生，而通过基因芯片筛选和RT-PCR验证后确定lncRNA-U2在顺铂耐药转变中发挥重要作用；lncRNA-U2促进顺铂耐药的作用可能是通过调控Bax/Bcl-2等细胞凋亡蛋白实现的。

专利文献CN105907858A，公开日2016.08.31，采用lncRNA芯片技术对卵巢癌组织中化疗耐药lncRNA筛选；对样本上的靶基因进行GO和Pathway分析，得出靶基因的功能与肿瘤增殖、凋亡、存活相关，以及涉及肿瘤耐药相关的信号通路；对编码蛋白的lncRNA进行筛选，选择差异倍数较大的3条lncRNA，对lncRNA表达情况进行观察，得出RP11-697E22.2在所有卵巢癌细胞细胞株中表达均显著升高，进而得出lncRNA RP11-697E22.2参与了不同类型卵巢癌耐药的调控，能够作为卵巢癌防治的干预靶标。