[发明专利]坦布苏病毒非结构蛋白NS4B截短蛋白的表达方法及其产品和应用

权利要求书

1.坦布苏病毒非结构蛋白NS4B截短蛋白的表达方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）以感染坦布苏病毒的鸭胚成纤维细胞提取的RNA为模板，反转录合成cDNA，然后以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列为引物进行PCR扩增，扩增获得NS4B截短基因；

2）将步骤1）扩增获得的NS4B截短基因连入表达载体获得重组表达载体，然后将重组表达载体转化宿主表达菌，获得工程菌，然后将工程菌用IPTG诱导表达，经纯化获得坦布苏病毒非结构蛋白NS4B截短蛋白，

所述表达载体为pGEX-4T-1质粒，

所述诱导表达为将工程菌培养至A600=0.6时，按终浓度为0.4~0.5mM加入IPTG，诱导表达6~8小时。

2.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS4B截短蛋白的表达方法，其特征在于：步骤2）中，所述宿主表达菌为BL21(DE3)。

3.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS4B截短蛋白的表达方法，其特征在于：所述纯化为取诱导表达菌液，离心收集菌体，然后加入相当于菌液体积1/10的浓度为20mM、pH为8的Tris-HCl重悬菌体，取重悬菌液，加入相当于重悬菌液体积1/5的6×loadingbuffer，100℃水浴加热变性10分钟后用12%的 SDS-PAGE凝胶电泳，电泳后用0.25 mMol/L的KCL溶液显色，切胶回收目的片段，利用透析袋获得坦布苏病毒NS4B截短蛋白。

4.由权利要求1~3任一项所述的表达方法获得的坦布苏病毒非结构蛋白NS4B截短蛋白。

5.权利要求4所述坦布苏病毒非结构蛋白NS4B截短蛋白在制备抗坦布苏病毒非结构蛋白NS4B多克隆抗体中的应用。

6.利用权利要求4所述坦布苏病毒非结构蛋白NS4B截短蛋白制得的抗坦布苏病毒非结构蛋白NS4B多克隆抗体。

7.权利要求6所述抗坦布苏病毒非结构蛋白NS4B多克隆抗体在制备检测坦布苏病毒感染的试剂中的应用。