[发明专利]一种黄曲霉毒素定量检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B₁的检测试剂盒，其特征在于：包括黄曲霉毒素B₁标准品、酶标板、链酶亲和素、第一生物素标记的黄曲霉毒素B₁核酸适体、第二生物素标记的互补链、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)、显色液、终止液。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B₁的检测试剂盒，其特征在于：所述酶标板为96孔酶标板，和/或所述显色液为3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)。

3.根据权利要求1或2所述的黄曲霉毒素B₁的检测试剂盒，其特征在于：其中黄曲霉毒素B₁标准品被配置成黄曲霉毒素B₁标准工作液，所述黄曲霉毒素B₁标准工作液的浓度为0～100ng/ml。

4.根据权利要求1或2所述的黄曲霉毒素B₁的检测试剂盒，其中所述酶标板 的包被液为0.05～0.2M的碳酸缓冲液，3～6μg/ml的链霉亲和素包被并用2～4％牛血清蛋白封闭。

5.根据权利要求1或2所述的黄曲霉毒素B₁的检测试剂盒，其特征在于：第一生物素序列如SEQ ID NO：1所示，且所述第一生物素序列的5′末端经生物素标记，和/或第二生物素序列如SEQ ID NO：2所示，且所述第二生物素序列的5′末端经生物素标记；其中，

所述SEQ ID NO：1序列为：

5′-biotin-GTTGGGCACGTGTTGTCTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3′；

所述SEQ ID NO：2序列为：5′-biotin-TGTGGGCCTAGCG-3′。

6.一种黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

设定酶标仪检测参数；

选择合适的酶标板，并将链酶亲和素包被于所述酶标板上，所述酶标板的孔至少包括样品孔和对照孔，在所述酶标板的每个孔中加入第一生物素标记的黄曲霉毒素B₁核酸适体，并进行孵育和洗涤；

在所述酶标板的每个孔中加入第二生物素标记的互补链，并进行孵育和洗涤；

在所述样品孔中加入待测样品，所述对照孔中加入等体积的阴性对照液，并进行孵育和洗涤；

在所述酶标板的每个孔中加入HRP-SA，并进行孵育和洗涤；

在所述酶标板的每个孔中加入显色液，反应后再加入终止液终止反应；

用酶标仪读取所述酶标板各孔吸光度值，并记录数据，计算样品中黄曲霉毒素B₁的浓度。

7.根据权利要求6所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于，所述吸光度值的测试，采用双波长检测，测A_450nm/620nm。

8.根据权利要求6所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于，所述显色液为3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)，和/或所述终止液为H₂SO₄。

9.根据权利要求6所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于，第一生物素序列如SEQID NO：1所示，且所述第一生物素序列的5′末端经生物素标记，和/或第二生物素序列如SEQID NO：2所示，且所述第二生物素序列的5′末端经生物素标记；其中，

所述SEQ ID NO：1序列为：

5′-biotin-GTTGGGCACGTGTTGTCTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3′；

所述SEQ ID NO：2序列为：5′-biotin-TGTGGGCCTAGCG-3′。

10.根据权利要求6所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于，其中所述酶标板的包被液为0.05～0.2M的碳酸缓冲液，3～6μg/ml的链霉亲和素包被并用2～4％牛血清蛋白封闭。