[发明专利]海胆黄多糖抗乙型肝炎病毒的用途

说明书

本发明公开了海胆黄多糖在细胞水平上抗乙型肝炎病毒上的应用，应用的具体方式为：将海胆黄多糖用于对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的表达、pgRNA及total RNA的转录、core蛋白的表达以及胞内外HBV DNA复制的抑制。本发明提供了海胆黄多糖的一种新用途，将海胆黄多糖用于抗乙型肝炎病毒，为治疗乙型肝炎病毒提供一种新的方式。

技术领域

本发明涉及一种海胆黄多糖的新用途，具体涉及海胆黄多糖在细胞水平上抗乙型肝炎病毒的作用，属于天然活性物质的应用领域。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)感染是急性肝炎、慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化及肝癌的主要诱因，严重威害人类的生命和健康。目前全球大约有25亿人感染乙型肝炎病毒，有大约4亿人逐渐发展为慢性乙型肝炎。乙型肝炎病毒可分为8个不同的基因型，即A、B、C、D、E、F、G、H。HBV高度的变异性与多样性决定了众多基因亚型的存在，基因亚型间序列差异至少大于4％。乙型肝炎病毒可以引起非常严重的并发症和死亡，对其预防和控制耗费着大量的社会资源。

中国是乙肝病毒感染的高发区，根据卫生部2013年公布的数据，2006年全国人群血清流行病学调查显示，我国乙肝感染流行率为34.28％，HBsAg流行率为7.18％，推算我国目前感染过乙肝病毒的人有近5亿，HBsAg携带者9300万人。自1992年起，由于我国实施了新生儿免费接种疫苗的政策，5岁以下儿童携带率已降到0.96％，HBsAg流行率较原来的10-15％有明显下降而成为中度流行区。对于慢性HBV感染，尚缺乏彻底清除病毒的治愈性药物，必需长期依赖于核苷类似物与干扰素类药物来降低血清HBV拷贝数。由于核苷类似物如拉米夫定、阿地福韦等存在着停药后反弹、耐药突变、交叉耐药等问题；而高剂量的重组干扰素也具有持续应答率低、副作用大等局限性；因此，治疗HBV感染引起的相关疾病尚缺乏十分有效的药物与手段。

各国科学家通过对不同来源的多糖进行广泛研究，发现多糖具有抗肿瘤、心血管疾病治疗、免疫调节、抗病毒等方面的作用。多糖作为药物于20世纪50年代被广泛研究，但目前为止已发现数百种多糖具有生物活性，研究发现多种多糖具有抗乙肝病毒的活性，包括动物、植物以及微生物多糖。海胆黄多糖(SEP)是从光棘球海胆中分离纯化得到的多糖，利用物理化学分析和GC分析对其结构进行鉴定，证明为从海胆黄中分离到的一种葡聚糖。药理实验研究表明，海胆黄多糖不但具有免疫调节活性，还有具有天然抗肿瘤活性。之前研究发现海胆黄多糖在体内外通过免疫调节机制发挥抗肿瘤活性，但对于海胆黄多糖抗HBV的活性尚未报道，所以我们研究了一下海胆黄多糖抗HBV的作用。

发明内容

针对现有治疗HBV技术上的不足，本发明提供了海胆黄多糖的新用途，利用海胆黄多糖在细胞水平上抗HBV的作用，从而提供一种新的抗HBV的物质。

鉴于现有对于HBV治疗技术上的不足，本发明提供了一种新的技术方案，将海胆黄多糖在细胞水平上作为抗HBV的药物。

具体实施方式为利用海胆黄多糖抑制HBsAg、HBeAg的分泌以及对HBV RNA的转录抑制和HBV DNA的复制抑制。其主要内容包括利用线粒体MTT法检测海胆黄对HepG2.2.15的细胞毒性，发现其在800μg/ml的浓度下对HepG2.2.15的细胞毒性较小。用酶联免疫吸附法检测海胆黄多糖对HBsAg及HBeAg的影响，发现其在400μg/ml对两种抗原具有明显的抑制作用，存在剂量和时间的依赖性关系。用荧光定量PCR检测海胆黄多糖对HBV RNA及DNA的影响，发现其在400μg/ml对HBV RNA及DNA的表达存在显著性的抑制作用，确定其在病毒复制水平上抑制了HBV的转录和复制。