[发明专利]一种原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法

说明书

本发明公开了一种原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法，其特征在于采用分子生物学方法获取该库蠓的COI基因序列，通过基因序列相似性的比对，对该库蠓进行种类鉴定。本发明提供的原野库蠓分子鉴定方法，有利于实现原野库蠓准确、快速的鉴定。

技术领域

本发明涉及本发明涉及物种鉴定领域，特别涉及原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法。

背景技术

吸血库蠓是一类微小型昆虫，可传播和携带蓝舌病、丝虫病、奥罗普切病毒、西尼罗河病病原体，是重要的医学昆虫之一。近年来，随着全球气候变暖，在一定程度上使库蠓传播虫媒病病毒的能力提高，也使媒介库蠓的分布范围向地球两极和高海拔地区扩大，库蠓种群传播虫媒病毒给动物群的能力增加，一些传统的“非媒介”库蠓种类具有了传播疫病的能力。由库蠓传播的虫媒病如蓝舌病、鹿流行性出血病、水泡性口炎、施马伦贝格病等，在全球一些国家或地区的传播和流行，造成了巨大的经济损失，对畜牧业发展构成了严重威胁。

同时据相关文献记载，全世界已知蠓科有125属5360种。蠓科中的吸血蠓类是蠓科昆虫中能叮刺人和畜等动物种类的总称，是医学昆虫的重要类群之一，其种类在全世界已知有4属1503种，4个属包括库蠓属(Culicoides)、蠛蠓属(Lasiohlea)、细蠓属(Leptoconops)和澳蠓属(Austroconops)。其中库蠓属是蠓科中最大的一个属，也是四大吸血蠓属中分布最广、蠓种最多、与人畜关系最密切的一个属，兼吸人和动物血液，传播疾病，危害人体健康，对畜牧业发展影响极大。现知库蠓有1247种，占世界已知蠓科的23.3％，占已知4个吸血蠓属的83％。据群落多样性分析结果表明，我国库蠓优势种由南向北渐趋突出，而多样性指数则南方高于北方。在华南热带雨林地区发现的库蠓种类有133种。

可见对吸血库蠓的准确鉴定是控制蠓传疾病的重要基础，也是疾病预防控制的核心前提。但是由于吸血蠓体型微小，形态学鉴定比较复杂，同时多种种间存在许多具有相似特征的隐种(Cryptic species)组成的复合体(Complex)或种团(group)，仅有少部分经验丰富的分类学专家才能有效的鉴定其种类。而且形态学鉴定的成败还需通过制作完整的玻片标本来完成，标本制作过程步骤繁琐，周期长，难度大。因此对于吸血库蠓迫切需要一种新的方法，以弥补传统分类方法的缺陷，提高分类的效率和准确度。其中，库蠓属中分布范围最广的是原野库蠓(Culicoides homotomus)，分布于除西藏外的其他各省区，是刺叮家畜的主要吸血蠓种，成虫多见于牛舍，嗜吸牛、猪、马、狗、羊、驴、兔、山羊、绵羊及猴等动物血液，亦吸人血，孳生于多有机物之湿地、小水沟、稻田、河边浮泥中。为我国南方厩舍中众多的蠓种，应予重视。因此，建立一种针对原野库蠓的新鉴别方法，快速准确鉴定和区分出原野库蠓，将有助于潜在媒介的调查研究，以便弄清媒介库蠓的分布数量动态、生活习性，并掌握其各期在各种条件下的活动规律，进行有效防制，为我国媒介传播性疾病的控制提供理论依据。

分子分类技术是以遗传物质DNA序列分析为依据来阐明物种间的差别从分子水平上快速而准确地鉴别物种，它是分子生物学、计算机科学与传统分类学相结合的产物，作为一种崭新的分类学技术极大弥补了传统形态学鉴定的缺陷。其中，DNA条形码技术(DNABarcoding)是通过对一个标准目的基因的DNA序列进行分析，从而快速、准确地进行物种鉴定的技术。近几年来，DNA条形码技术已被证明是一个行之有效的生物鉴定手段，不仅可对传统鉴定方法作强有力的补充，而且因为其更客观、准确，突破以往对经验的过度依赖，能帮助鉴定物种、发现新种和隐种、重建物种和高级阶元的演化关系等。