[发明专利]一种鞣花酸试剂及其配制方法与活化部分凝血活酶时间测定试剂、APTT试剂盒

说明书

一种鞣花酸试剂及其配制方法与活化部分凝血活酶时间测定试剂、APTT试剂盒，涉及临床诊断试剂领域。配制方法是将鞣花酸加入无钙纯化水中，快速搅拌，使其均匀分散；加入碱性缓冲液或无机碱；在加入鞣花酸后10分钟内快速加入酸性缓冲液或有机酸、无机酸；加入金属离子；加入氨基酸及其衍生物，得缓冲液；另外在兔脑磷脂中加入无钙纯化水，混匀乳化得乳化磷脂；将乳化磷脂加入缓冲液中，快速搅拌混匀，得到鞣花酸试剂，该工艺简单快捷，且均有详细说明。活化部分凝血活酶时间测定试剂包括上述的鞣花酸试剂和氯化钙试剂，具有良好的稳定性。包括上述活化部分凝血活酶时间测定试剂的APTT试剂盒能直接取代进口高稳定性APTT试剂盒。

技术领域

本发明涉及临床诊断试剂领域，且特别涉及一种鞣花酸试剂及其配制方法与活化部分凝血活酶时间测定试剂、APTT试剂盒。

背景技术

在临床检查的领域中，已知通过测定血液的凝固时间来研究血液凝固因子的异常等检查，其中，APTT测定作为一般的血液凝固能力的临床检查之一。APTT(activatedpartial thromboplastin time)即活化部分凝血活酶时间，是指反映出血时血液通过与有阴性电荷的异物接触而开始的内因性凝固途径的功能的凝固时间。APTT测定不仅是在内因性凝固因子的缺乏或异常的筛选检查中利用，还在肝素疗法的监测等中利用。

现有APTT试剂大多采用兔脑磷脂，该磷脂在空气中易变为红棕色，有吸湿性，不溶于水和丙酮，微溶于乙醇，溶于氯仿和乙醚，因此存在溶解问题，若强行搅拌溶解会产生不均匀的不溶物，从而导致工艺不可控，若加热溶解则可能使磷脂失活甚至氧化。通过检索，部分现有专利并未详细说明磷脂处理过程，另外一些现有专利公开的磷脂处理均存在一些问题，例如：申请号CN200710036410.1的发明专利中的兔脑提取脑磷脂用蒸馏水溶解，这很难实现，因此该专利存在工艺误导；申请号CN200810083554.7的发明专利公开的液体白陶土APTT试剂虽表明其37℃下可稳定至少30天，但并未披露其具体工艺，再加之激活剂的不同，试剂的敏感性亦不同，该APTT试剂的性能未可知。

出于临床灵敏度、疾病鉴别或品质升高的目的，近年，将多种合成磷脂混合使用(参照例如，US2011/159597)。另外，作为合成磷脂的种类，将磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰胆碱(PC)及磷脂酰丝氨酸(PS)的3种混合而含在试剂中成为主流，但合成磷脂种类较多，不易获取且价格昂贵，另外各组分比例亦较难把控，同样存在溶解问题，部分会导致沉淀生成，影响试剂品质。现有试剂会存在鞣花酸及磷脂沉淀问题，鞣花酸缓冲液，原料处理如鞣花酸在碱性条件下会失去活性，磷脂乳化是否均匀，鞣花酸缓冲液与磷脂的配比问题等都直接影响了国产试剂的品质，导致市场仍被以西门子、思塔高、沃芬等巨头占有。

因此，一种制作工艺简单，稳定性高，能直接取代进口高稳定性活化部分凝血活酶时间(APTT)试剂盒被市场所期待。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鞣花酸试剂及其配制方法，包括磷脂乳化，鞣花酸溶解，各原料添加顺序、APTT时间调节等的生产工艺，该工艺简单快捷，且均有详细说明。

本发明的另一目的在于提供一种活化部分凝血活酶时间测定试剂，该试剂具有良好的稳定性，37℃下可稳定至少30天，试剂开盖后于5±3℃下至少稳定30天以上。

本发明的另一目的在于提供一种APTT试剂盒，能直接取代进口高稳定性活化部分凝血活酶时间(APTT)试剂盒。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

本发明提出一种鞣花酸试剂的配制方法，其包括以下步骤：

将鞣花酸加入无钙纯化水中，快速搅拌，使其均匀分散；首先加入碱性缓冲液或无机碱；然后在加入鞣花酸后10分钟内快速加入酸性缓冲液或有机酸、无机酸，调pH至7.1±0.1；之后加入金属离子；接着加入氨基酸及其衍生物，得缓冲液；