[发明专利]一种产低温脂肪酶菌株XLB016及其应用

说明书

本发明涉及一种产低温脂肪酶菌株XLB016及其应用，可有效解决低温脂肪酶的生产制备问题，解决的技术方案是，一种产低温脂肪酶菌株XLB016，分类命名为喜冷杆菌(Cryobacteriumsp.)，于2017年12月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.15049；制备低温脂肪酶的方法包括：制备LB斜面培养基、制备发酵培养基、制备斜面菌种、发酵和酶液的制备；本发明制备工艺简单、高效，节能环保，制备出的脂肪酶酶活性高，具有良好的低温活性，在20‑30℃下，pH6.0‑9.0之间能保持高的酶活，经济和社会效益显著。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是一种产低温脂肪酶菌株XLB016及其应用。

背景技术

脂肪酶(Triacylglycerol acylhydrolase，EC3.1.1.3)是一类能催化天然油脂底物水解，产生甘油二酯、甘油单酯、脂肪酸和甘油的水解酶。脂肪酶广泛存在于各种动物、植物和微生物中。作为重要的工业用酶，脂肪酶被广泛应用于食品加工及食品风味改良、油脂工业、洗涤工业、饲料工业及生物能源等方面。此外，脂肪酶还能催化酯类化合物的合成、酯交换和转脂等反应，因此，脂肪酶是在有机合成中应用最广泛的酶类。近年来，在医药工业中，脂肪酶因能被用于手性制备光学纯的药物而倍加瞩目。

与中温、高温型脂肪酶相比，低温脂肪酶在低温下能保持高酶活力及高催化效率，可大大缩短处理过程的时间并省却昂贵的加热或冷却费用，在节能方面有相当大的优势。利用微生物发酵生产的低温脂肪酶，用于食品洗涤剂、食品乳化剂、化妆品、药品等领域可以显著的提高生产效率，降低生产成本，改善并提高产品质量，可以从根本上摆脱中温、高温酶的加热、冷却设备和工艺。低温脂肪酶将为人类摆脱生存和发展中所面临的诸如资源、能源危机以及环境污染等困境提供现实的机遇。低温脂肪酶具有非常广阔的开发潜力和应用前景。到目前为止，已经报道了很多能产低温脂肪酶的微生物菌株，例如：Candidaantarctica,

Aeromonas sp.,Pseudoalteromonas sp.,Pseudomonas sp.,和Psychrobactersp.等，但与巨大的对低温脂肪酶的市场需求相比，这还远远不够，为了得到活力更高，性能更加优越的低温脂肪酶，还需要不断地分离新的产低温脂肪酶的菌株。

喜冷杆菌属(Cryobacterium)是日本科学家Suzuki于1997年从南极土壤中分离并命名的一个新的嗜冷性的细菌属，这个属的细菌的种的生长温度极低，为了适应极低的生长环境，菌种在生长代谢过程中一定会合成一些低温酶以利于其生长。然而，到目前为止，还没有这个属的菌株能够产胞外酶的相关报道。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明的目的就是提供一种产低温脂肪酶菌株XLB016及其应用，可有效解决低温脂肪酶的生产制备问题。

本发明解决的技术方案是，一种产低温脂肪酶菌株XLB016，分类命名为喜冷杆菌(Cryobacterium sp.)，于2017年12月12日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.15049。

所述的产低温脂肪酶菌株XLB016用于制备低温脂肪酶的方法，包括以下步骤：

(1)制备LB斜面培养基：将蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g加300mL水溶解，调pH至6-9，加琼脂粉20g，加水定容至1000mL，加热将琼脂溶解，装于容器中，密封，于121℃下灭菌20min，摆斜面，得LB斜面培养基；

(2)制备发酵培养基：将蔗糖5g，蛋白胨3g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.3g，橄榄油乳化液20mL，加300mL水溶解，调pH至6-8，加水定容至1000mL，混匀，于115℃下灭菌20min，得发酵培养基；