[发明专利]融合猪抗菌肽FPAP重组酵母菌制剂的制备及应用

说明书

本发明公开了融合猪抗菌肽FPAP重组酵母菌制剂的制备及应用。本发明所提供的融合蛋白，包括猪抗菌肽PR‑39、猪抗菌肽Tritrpticin、猪抗菌肽PAMP23和猪抗菌肽PG1；所述猪抗菌肽PR‑39、猪抗菌肽Tritrpticin、猪抗菌肽PAMP23和猪抗菌肽PG1的氨基酸序列分别为序列1第1‑42位、序列1第51‑63位、序列1第72‑94位和序列1第103‑129位。实验证明，本发明的FPAP可以促进淋巴细胞、红细胞和白细胞的增殖，抑制致病微生物的生长，促进非特异性抗体(IgG、IgG1、IgG2a)及疾病特异抗体的分泌，提高动物的免疫能力与存活率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种融合猪抗菌肽FPAP重组酵母菌制剂的制备及应用。

背景技术

现在限制我国养殖业进一步发展和提高经济效益的主要问题是动物疾病的控制、动物产品质量提高和优质廉价饲料的开发生产。我国出口动物产品因检疫和药残质量较低，出口所占比例很低，如猪肉为23万多吨，仅占国际贸易量的4％左右。尤其是四川动物饲料的豆粕等蛋白质原料的90％和玉米等能量饲料原料的70％均依赖外部供给，这就严重制约了我省的畜牧业生产发展和经济效益的提高。因此，如何利用高新生物技术开发高效特色生物饲料，充分利用本地饲料资源，减少饲料中抗生类素添加剂的使用，克服动物产品的药残危害，保障绿色有机动物食品的生产，保护人民群众生命健康安全，已成为当代亟需解决的重大科技和社会经济难题。

目前中国畜禽养殖业随着集约化程度提高，畜禽养殖规模和养殖密度日益扩大，迫于控制30多种传染性病原感染传播扩散的压力，尤其是禽流感和呼吸繁殖综合症等烈性病相继循环爆发，动物养殖中耐药菌引起的腹泻，沙门、大肠杆菌、链球菌、蓝耳病(PRRSV)、圆环病毒(PCV2)、猪瘟(CSFV)等各种细菌、病毒性疾病，长期以来是畜牧养殖中瓶颈限制问题，严重阻碍畜牧业的发展；使抗生素等药物添加剂在饲料的滥用情况非常严重，畜禽疾病和抗生素饲料添加剂的公害问题已经成为制约我国畜禽养殖业发展水平和经济效益提高的瓶颈。饲料抗生素添加剂的滥用不仅提高饲养成本，也导致病原微生物的耐药性和致病力明显增强，严重破坏了动物消化道的微生态平衡，长期使用后在动物体内残留、并富集，畜禽机体因药物毒副作用而削弱健康水平，免疫抗病力显著下降。如此恶性循环，畜禽各种烈性传染疾病频繁发生，难于控制和治疗。而另一方面，药物残留及日益严重的畜禽产品食品安全问题，不仅直接威胁着人类自身的健康，也阻碍了养殖业的发展。

动物饲料添加抗生素，长期或不适当使用不仅将诱导病菌出现抗药性，而且在动物产品出现药物残留，造成严重的食品安全隐患，损害人类健康以及招致治疗抗生素的药物失效。欧盟、美国等发达地区2006年开始全面限制抗生素作为饲料添加剂。我国也将严格限制饲料添加抗生素。现代养殖业急需开发取代传统抗生素的无残留、无抗性诱导、安全无污染的新型生物饲料及其添加剂。

抗菌肽分子量小，分离纯化和检验存在一定的困难。目前科研中抗菌肽的主要来源是化学合成，但化学合成成本高，量小，不利于大规模应用。所以，我们利用基因工程手段，重组连接多个抗菌肽基因，获得具有广谱抗多种微生物(G+、G-、病毒、真菌、寄生虫)和免疫调节活性的高效重组抗菌肽分子。

有关抗菌肽基因与其它相关基因融合克隆和表达的报道也逐渐增多，但很少见有关将多种均有抗菌活性的短肽基因融合，并在共表达后形成多个活性分子而协同抗菌抗感染提高免疫水平的报道。本发明通过基因重组融合，构建新的具有抗细菌、病毒、真菌及寄生虫和免疫调节等多种活性的融合抗菌肽基因(PR-39/Tritrpticin/PAMP23/PG1cDNA，)，将其连接到真核酵母表达技术获得融合蛋白，进一步通过相对MIC法研究融合蛋白的免疫调节活性及其抗菌、抗病毒活性，以获得广谱高效抗微生物以及免疫调节作用强的重组蛋白。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何提高动物的免疫能力。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种蛋白质，名称为FPAP，包括4种猪抗菌肽；