[发明专利]融合牛抗菌肽FBAP重组酵母菌制剂的制备及应用

说明书

本发明公开了融合牛抗菌肽FBAP重组酵母菌制剂的制备及应用。本发明所提供的包括4种牛抗菌肽；所述4种牛抗菌肽的氨基酸序列分别为序列1第1‑12位、序列1第21‑32位、序列1第41‑55位和序列1第63‑75位。实验证明，本发明的FBAP可以促进淋巴细胞、红细胞和白细胞的增殖，抑制致病微生物的生长，促进非特异性抗体(IgG、IgG1、IgG2a)及疾病特异抗体的分泌，提高动物的免疫能力与存活率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种融合牛抗菌肽FBAP重组酵母菌制剂的制备及应用。

背景技术

目前中国畜禽养殖业随着集约化程度提高，畜禽养殖规模和养殖密度日益扩大，迫于控制30多种传染性病原感染传播扩散的压力，尤其是禽流感和呼吸繁殖综合症等烈性病相继循环爆发，动物养殖中耐药菌引起的腹泻，沙门、大肠杆菌、链球菌、蓝耳病(PRRSV)、圆环病毒(PCV2)、猪瘟(CSFV)等各种细菌、病毒性疾病，长期以来是畜牧养殖中瓶颈限制问题，严重阻碍畜牧业的发展；使抗生素等药物添加剂在饲料的滥用情况非常严重，畜禽疾病和抗生素饲料添加剂的公害问题已经成为制约我国畜禽养殖业发展水平和经济效益提高的瓶颈。饲料抗生素添加剂的滥用不仅提高饲养成本，也导致病原微生物的耐药性和致病力明显增强，严重破坏了动物消化道的微生态平衡，长期使用后在动物体内残留、并富集，畜禽机体因药物毒副作用而削弱健康水平，免疫抗病力显著下降。如此恶性循环，畜禽各种烈性传染疾病频繁发生，难于控制和治疗。而另一方面，药物残留及日益严重的畜禽产品食品安全问题，不仅直接威胁着人类自身的健康，也阻碍了养殖业的发展。

动物饲料添加抗生素，长期或不适当使用不仅将诱导病菌出现抗药性，而且在动物产品出现药物残留，造成严重的食品安全隐患，损害人类健康以及招致治疗抗生素的药物失效。欧盟、美国等发达地区2006年开始全面限制抗生素作为饲料添加剂。我国也将严格限制饲料添加抗生素。现代养殖业急需开发取代传统抗生素的无残留、无抗性诱导、安全无污染的新型生物饲料及其添加剂。

天然抗菌肽分子量小，抗菌活性有限，抗菌谱不宽；从动物分离纯化制备比较困难。化学合成抗菌肽成本高，过程复杂，难于在动物生产中大规模应用。所以，我们利用基因工程手段，拼接多个抗菌肽基因，获得具有多种抗微生物(G+、G-、病毒、真菌、寄生虫)活性的、高效重组抗菌肽分子。

有关抗菌肽基因与其它相关基因融合克隆和表达的报道也逐渐增多，但少见有关将多种均有抗菌活性的短肽融合表达，并在表达后自分裂形成单个活性分子的报道。本发明通过基因重组，融合具有抗细菌、病毒、真菌及寄生虫和免疫调节等活性的多种抗菌肽基因，将其连接到真核酵母表达获得融合蛋白，进一步研究融合蛋白的免疫调节效应及其抗菌防感染活性，获得广谱高效抗微生物以及免疫调节作用强的重组蛋白。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何提高动物的免疫抗菌能力。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种蛋白质，名称为FBAP，包括4种牛抗菌肽；

所述4种牛抗菌肽的氨基酸序列分别为序列1第1-12位、序列1第21-32位、序列1第41-55位和序列1第63-75位。

上述蛋白质为如下a)-e)中任一种蛋白质：

a)氨基酸序列包括序列表中序列1所示的氨基酸序列的蛋白质；

b)氨基酸序列由序列表中序列1所示的氨基酸残基组成；

c)将a)或b)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有提高动物免疫能力功能的蛋白质；

d)与a)或b)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有提高动物免疫能力功能的蛋白质；

e)a)-d)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。