[发明专利]鳖甲中提取的血管紧张素转换酶抑制肽及其制备方法

说明书

本发明公开了从鳖甲中提取的血管紧张素转换酶抑制肽及其制备方法，包括两种活性肽，其中一种活性肽的氨基酸序列为Lys‑Arg‑Glu‑Arg，另一种活性肽的氨基酸序列为Leu‑His‑Met‑Phe‑Lys；本发明以鳖甲为原料用水提取获得反应原料液，经酶解处理、微滤及超滤后，以凝胶层析柱和阴离子交换层析柱分离得到抑制肽原料，再对抑制肽原料进行多次色谱法分离纯化，获得血管紧张素转换酶抑制肽。本发明原料储量大、价格低，制备工艺合理、可操作性强，获得的血管紧张素转换酶抑制肽活性好。

技术领域

本发明属于功能食品领域，具体涉及鳖甲中提取的血管紧张素转换酶抑制肽及其制备方法。

背景技术

血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme，ACE)为含锌离子的二肽水解酶，其主要生物学功能是切除血管紧张素I(Angiotensin I，AngI)的羧基端二肽生成血管紧张素II(Angiotensin II，AngII)，从而激发一系列生理反应，同时使舒缓激肽失活，对血液循环造成的直接影响是使血压升高。血管紧张素转换酶抑制剂(Angiotensinconverting enzyme inhibitor，ACEI)会对ACE产生抑制活性从而可用于治疗高血压。

在肝脏等多种组织器官中存在局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)，RAAS已被证实是肝纤维化发展过程中的重要环节之一。ACEI在局部RAAS系统中能够通过影响相关成分对肝纤维化产生抑制效果，已证实赖诺普利(lisinopril)、培哚普利(perindopril)、卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)和福辛普利(fosinopril)均会对RAAS系统及其相关通路产生不同影响，从而表现出对大鼠肝纤维化模型的抑制作用。

血管紧张素转换酶抑制肽(ACEIP)是ACEI的重要组成，其来源广泛，近几十年来人们已经从动物血液、鸡蛋、乳类、肉类、鱼类、大豆、玉米、小麦等常见食用性蛋白中筛分出上百种ACEIP。酶法制备已经成为获取ACEIP的主要方法，该法具有安全性高、条件温和、易于控制、容易实现工业化生产、成本低等优势，因而是工业化生产活性肽的主要技术。天然蛋白质肽链内部通常存在功能区，通过蛋白酶的水解可将其中隐藏的活性肽释放出来，从而发挥出生理功能。

鳖甲为鳖科动物中华鳖(Trionyx sinensis)和山瑞鳖(T.steindachneri)的背甲，中华人民共和国卫生部将其列入可用于保健食品的物品名单，其主要功效是治疗慢性肝纤维化、肝硬化、肝癌等症。鳖甲的肽类成分是主要活性物质，已经从鳖甲中分离鉴定的活性肽类成分包括，从抗肝纤维化活性组分中鉴定的NDDY、HGRFG、NPNPT、WLYPGNTSC和YSGAW，对急性肝损伤小鼠有治疗效果的GAGPHGG。鳖甲煎口服液被证实能够通过影响RAAS系统的主要成分延缓肝纤维化的发生与发展，筛选分离鳖甲中的ACEIP，可能也会对肝内RAAS系统产生影响，进而对肝纤维化的发生发展产生抑制。目前鲜有以鳖甲为原料制备ACEIP的报道。

发明内容

本发明提供以鳖甲为原料提取的血管紧张素转换酶抑制肽Lys-Arg-Glu-Arg和Leu-His-Met-Phe-Lys及其制备方法，本发明用木瓜蛋白酶酶解鳖甲提取液，再将提取液微滤及超滤后得到超滤液，再多次使用色谱法从超滤液中提取制备得到Lys-Arg-Glu-Arg和Leu-His-Met-Phe-Lys这两种血管紧张素转换酶抑制肽，为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

鳖甲中提取的血管紧张素转换酶抑制肽，包括两种活性肽，其中一种活性肽的氨基酸序列为Lys-Arg-Glu-Arg，另一种活性肽的氨基酸序列为Leu-His-Met-Phe-Lys。

鳖甲中提取的血管紧张素转换酶抑制肽的制备方法，包括如下步骤：