[发明专利]PD-L1 CAR-NK细胞及其制备和应用有效
| 申请号： | 201810124500.4 | 申请日： | 2018-02-07 |
| 公开（公告）号： | CN110079502B | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 韩昆昆;王保垒;李华顺;任宝永 | 申请（专利权）人： | 阿思科力（苏州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京布瑞知识产权代理有限公司 11505 | 代理人： | 孟潭 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | pd l1 car nk 细胞 及其 制备 应用 | ||
1.PD-L1 CAR-NK细胞，所述PD-L1 CAR-NK细胞能够表达嵌合抗原受体，其中，所述嵌合抗原受体包含抗原结合结构域、跨膜结构域和共刺激信号传导区，所述的抗原结合结构域能够特异性结合肿瘤特异性抗原PD-L1配体，并通过跨膜结构域和共刺激信号传导区激活该NK细胞；
所述嵌合抗原受体是结构为ScFV-CD8αhinge-CD8TM-4-1BB-CD3ζ的融合蛋白，其中所述的ScFV能够特异性结合肿瘤特异性的PD-L1配体；
所述ScFV-CD8αhinge-CD8TM-4-1BB-CD3ζ融合蛋白的氨基酸的序列如SEQ ID NO：1所示；
所述NK细胞为NK-92细胞。
2.根据权利要求1所述的PD-L1 CAR-NK细胞，其特征在于，所述ScFV-CD8αhinge-CD8TM-4-1BB-CD3ζ融合蛋白的编码核苷酸的序列如SEQ ID NO：2所示或其简并序列。
3.如权利要求1或2所述的PD-L1 CAR-NK细胞，其能够有效地杀伤和/或杀死肺癌细胞A549、乳腺癌MDMB-231细胞、结肠癌细胞SW480、乳腺癌MCF-7细胞和肺癌细胞H1299。
4.权利要求1-3中任一项所述PD-L1 CAR-NK细胞的制备方法，其包括如下步骤：
（1）合成和扩增编码权利要求1-3中任一项所述的ScFV-CD8αhinge-CD8TM-4-1BB-CD3ζ融合蛋白的核苷酸，并将所述核苷酸克隆到慢病毒表达载体上；
（2）利用慢病毒包装质粒和步骤（1）得到的慢病毒表达载体质粒感染细胞，包装和制备慢病毒；
（3）利用步骤（2）得到的慢病毒感染NK-92细胞，得到CAR-NK细胞。
5.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的PD-L1 CAR-NK细胞和/或权利要求4所制备的PD-L1 CAR-NK细胞。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其还包括药学可接受的辅料。
7.权利要求1-3中任一项所述的PD-L1 CAR-NK细胞和/或权利要求4所制备的PD-L1CAR-NK细胞在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途；所述癌症为肺癌、乳腺癌和/或结肠癌。
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