[发明专利]一种可同时定量检测血液中CEA和CA19-9的磁性免疫层析试纸条及制备方法

说明书

本发明公开了一种可同时定量检测血液中CEA和CA19‑9的磁性免疫层析试纸条及其制备方法。该试纸条是在试纸条的底板上依次粘上样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水纸，且各相邻部件间互相交错重叠2mm，组装成试纸条，其中硝酸纤维素膜上预包被有CEA抗体和CA19‑9抗体的检测线和兔抗鼠IgG抗体的质控线。与现有的肿瘤标志物检测技术相比，本发明首次创造性地将磁性免疫层析技术引入到CEA和CA19‑9的联合定量检测中，实现CEA和CA19‑9微量定量分析，大大提高了检测灵敏度，在CEA和CA19‑9双阳性的基础上，可进一步判断肿瘤发生率及转移率，以提高对结肠癌的发生及转移的早期诊断率，达到即时检测及快速诊断的目的，操作简便，成本低且可广泛推广。

技术领域

本发明涉及一种医学检测技术领域的方法，特别是涉及一种可同时定量检测血液中CEA和CA19-9的磁性免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

癌胚抗原（CEA）是一个广谱肿瘤标志物，它能向人们反映出多种肿瘤的存在。CEA是由Phil Gold和Samuel O. Freedman于1965年首先在结肠癌血清病人体内发现的一种球蛋白，其后续在胃癌、胰腺癌、肺癌及乳腺癌病人体内发现。文献报道其在结肠癌中的阳性率约为60%。结肠癌手术患者切除后，在1-3周内血中CEA可降至正常水平。若手术切除不完全，术后CEA还持续阳性，说明病人预后较差或已发生转移，甚至有复发的可能性。良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎和酒精性肝硬化病人CEA也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于20μg/L，CEA超过20μg/L时往往提示有消化道肿瘤，所以测定CEA可以作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。在实际临床应用中，常与其他肿瘤标志物联合检测提髙诊断肿瘤的灵敏度及特异性。由于癌肿切除后血清CEA逐渐下降，当有复发时会再次增高，因此可以用来判断本病的预后或有无复发。

肿瘤相关抗原（CA19-9）是一种糖链抗原，是由腺癌细胞产生，经胸导管引流至外周血中。它是一种与结肠癌、胃癌、胰腺癌和胆囊癌等相关的肿瘤标志物，又称胃肠道相关抗原。胚胎期胎儿的胰腺、胆囊、肝、肠等组织中存在这种抗原，正常人体组织中含量很低。CA19-9是结、直肠癌和胰腺癌的标志物，血清CA19-9阳性的临界值为37kU/L。CA19-9是迄今报道的对胰腺癌敏感性最髙的标志物，阳性率可达85%-95%，肿瘤切除后CA19-9浓度会下降，再上升，则可表示复发。因此，CA19-9常作为消化道恶性肿瘤病情监测和预示复发的主要指标。在结直肠癌、胆囊癌、胆管癌、肝癌和胃癌的阳性率也很高，若同时检测CEA和CA19-9可进一步提高阳性检测率。

迄今，在临床上，多数的肿瘤标志物检测方法都是针对单一肿瘤标志物的检测，而很少有对两个或两个以上的肿瘤标志物的联合检测。目前，检测肿瘤标志物的免疫分析方法主要包括放射免疫分析法（RIA）、酶联免疫分析法（ELISA）及化学发光免疫分析法（CLIA）等。虽然这些方法都能高灵敏、髙特异性地检测目标分析物，但是它们的成本高昂、检测周期长、步骤繁琐及需要专业实验人员操作等缺点，限制了其在基层医院及在社区人群中进行肿瘤筛查或术后病情监测的应用。因此，寻找一个针对肿瘤标志物的低成本、高灵敏度及高特异性、简便、快速的即时检测（point-of-care testing, POCT）技术，同时能实现对两个或者两个以上肿瘤标志物的定性和定量检测，并且能够应用到实验室以外的基层医院、社区或者个人以及医疗资源匮乏的地区，对于提高早期肿瘤发现率及术后复发率、转移率，维护全民健康有着重要的意义。

免疫层析法(Immunochromatography Assay，简称ICA) 是目前市场上最常见的一种快速诊断技术。目前，免疫层析测定法最常用的探针标记物包括胶体金、乳胶微粒、磁性粒子及荧光纳米粒子等。其中，胶体金是目前市场上使用最为广泛的标记材料，并且商品化的胶体金试纸条己经涉足很多领域的快速检测，如孕早期HCG的检测、致病微生物含量及农兽药残留的检测等。胶体金虽制备简单、可快速标记蛋白、可见性好，但稳定性差，与蛋白结合力弱。同时，对于胶体金等标记物构建的免疫层析系统，其定量检测由于光学仪器、自吸收、光散射和自身干扰等因素的影响，无法反应最真实的检测结果，影响检测的灵敏度。