[发明专利]一种检测全局调控因子IrrE蛋白及其转基因农作物的金标试纸条

说明书

本发明提供了一对杂交瘤细胞株，该对杂交瘤细胞株包括独立存放的第一杂交瘤细胞株和第二杂交瘤细胞株；所述第一杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC NO.12270；所述第二杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC NO.12271。本发明还提供了由这两株杂交瘤细胞分泌的一对配对单克隆抗体和它们在检测转IrrE的转基因农作物中的用途以及一种免疫胶体金试纸条和检测转IrrE的转基因农作物的方法。通过上述技术方案，本发明能够通过免疫胶体金试纸条，对IrrE蛋白的检测取得1ng/mL的灵敏度，对28种非转基因作物和16种不同来源的各种非IrrE转基因作物也不呈现交叉反应，具有较高的灵敏度和特异性。

技术领域

本公开涉及农业生物技术领域，具体地，涉及一种杂交瘤细胞对、一种单克隆抗体对、该单克隆抗体对在检测IrrE蛋白中的用途以及一种免疫胶体金试纸条。

背景技术

耐辐射异常球菌(Deinococcus radiodurans)是迄今发现对包括电离辐射、过氧化氢、紫外线辐射、丝裂霉素C和干旱等多种DNA损伤试剂都有很强的抗性的细菌菌株。1999年美国基因组研究所完成了耐辐射异常球菌全基因组测序，为其抗性机制的研究打下重要的理论基础。

研究发现，耐辐射异常球菌中irrE基因编码异常球菌属特异蛋白，是该菌属特有的、极其重要的DNA修复保护途径的开关基因，对DNA损伤修复起重要的作用。该基因突变造成菌株多种胁迫抗性丧失。研究认为irrE基因是一种新型的负责极端胁迫抗性的启动基因，在各种DNA损伤修复和保护极端胁迫反应的途径中起中心调控作用。将IrrE在大肠杆菌中组成型表达，使得大肠杆菌的电离辐射抗性提高近1.6倍。IrrE对电离辐射后大肠杆菌中RecA蛋白的表达起诱导作用。同时增强了电离辐射后细胞中过氧化氢酶KatG的活性，进而提高了细胞对氧自由基的清除能力。在3M山梨醇冲击、1％过氧化氢冲击以及53℃高温冲击等非生物胁迫实验结果表明，IrrE具有提高大肠杆菌渗透胁迫、氧化胁迫和高温胁迫的功能。同时，还发现了IrrE能提高大肠杆菌的耐盐能力。利用花椰菜花叶病毒35S启动子将IrrE蛋白在油菜中过量表达。表达IrrE的转基因油菜在萌发、生长、开花、结子等生长过程与对照植株没有差别，但表现出极好的耐盐抗旱能力。转基因植株能够在350mM氯化钠处理6周后正常的开花结子，而对照植物在处理2周时已全部死亡。研究发现高浓度盐胁迫下表达IrrE的转基因植株中胁迫诱导蛋白CBF1和CBF3、质膜钠转运蛋白SOS1以及超氧化物歧化酶SOD表达显著上调。推测全局调控因子IrrE通过直接或间接上调这些蛋白的表达，从而提高了转基因植株的耐盐抗旱能力。

现代生物技术的发展为利用外源基因培育新种农作物提供了途径。在转基因产品的研发、筛选或安全评估时，需要转基因生物检测技术对转入的外源性基因进行定性或半定量测定。现有的检测技术，如酶免法、放免法等，需要特殊的仪器设备(酶标仪、放免闪烁仪、离心机等)和专用的场地等，检测时间长(酶免检测时间需2h、放免检测需3h左右)，检测成本较高，需要专业的操作人员进行检测，实践推广应用的空间有限。因此，需要有一种操作简便、结果准确可靠、可快速检测转基因植物中IrrE蛋白的装置。

免疫结合胶体金层析法是免疫金标记技术和抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式。免疫结合胶体金层析法利用抗原抗体反应的原理，包括双抗体夹心法、双抗原夹心法、捕获法和竟争抑制法等实施方法，其中，以双抗体夹心法应用最为广泛。