[发明专利]利用叶绿体InDel标记鉴别玉米S型胞质不育材料

权利要求书

1.叶绿体InDel标记在玉米S型胞质不育材料分子标记辅助育种中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测玉米样品的DNA；

2)以步骤1)提取的DNA为模板，利用SEQ ID NO:3-4或SEQ ID NO:5-6所示的引物，进行PCR扩增；

3)分析PCR产物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR反应体系为：DNA模板2μL，20μmol/L上、下游引物各0.25μL，2.5mmol/LdNTP 1.2μL，25mmol/L MgCl₂ 2μL，1单位Taq DNA聚合酶，10×PCR Buffer 2μL，ddH₂O补齐至20μL；

PCR反应程序为：94℃5min；94℃40s，60℃35s，72℃45s，35个循环；72℃10min，4℃保存。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，步骤3)采用琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳检测PCR产物。

4.叶绿体InDel标记在玉米S型胞质不育材料分子标记辅助育种中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测玉米样品的DNA；

2)KASP反应：向步骤1)提取的DNA模板中加入KASP Primer mix和KASP ROX standardreaction mix，进行PCR扩增；

3)采用荧光检测仪分析PCR产物；

所述KASP Primer mix为SEQ ID NO:7和8所示引物5’端分别修饰不同荧光标签序列后，与SEQ ID NO:9和10所示引物形成的混合物；或者，

所述KASP Primer mix为SEQ ID NO:11和12所示引物5’端分别修饰不同荧光标签序列后，与SEQ ID NO:13所示引物形成的混合物；

其中，所述荧光标签序列为：5’-FAM-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；

5’-HEX-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR反应体系为：DNA模板1.5μL，KASP ROX standard reaction mix 0.5μL，KASP Primer mix 0.014μL，ddH₂O 0.5μL；所述KASP Primer mix中各引物的浓度为100μM；

PCR反应程序为：94℃15min；94℃20s，61-55℃1min，每个循环降低0.6℃，10个循环；94℃20s，58℃1min，30个循环。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤3)采用荧光检测仪分析PCR产物。