[发明专利]玉米叶绿体基因组的分子标记及在品种鉴定中的应用

权利要求书

1.基于KASP技术开发的用于玉米品种鉴定的分子标记的引物组合，其特征在于，所述分子标记包括以下57个SNP标记和6个InDel标记，它们的信息如下：

其中用于检测标记CPMIDP01的KASP引物包括上游引物1、上游引物2和下游引物1、下游引物2，序列为SEQ ID NO:301-304。

2.含有权利要求1所述引物组合的检测试剂或试剂盒。

3.权利要求1所述引物组合或权利要求2所述检测试剂或试剂盒在构建玉米品种叶绿体DNA指纹图谱中的应用。

4.权利要求1所述引物组合或权利要求2所述检测试剂或试剂盒在玉米样本母系溯源分析中的应用。

5.权利要求1所述引物组合或权利要求2所述检测试剂或试剂盒在玉米样本正反交鉴定中的应用。

6.权利要求1所述引物组合或权利要求2所述检测试剂或试剂盒在玉米分子标记辅助育种中的应用。

7.权利要求1所述引物组合或权利要求2所述检测试剂或试剂盒在玉米品种鉴定中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测玉米样品的DNA；

2)KASP反应：向步骤1)提取的DNA模板中加入KASP Primer mix和KASP ROX standardreaction mix，进行PCR扩增；

3)采用荧光检测仪分析PCR产物；

所述KASP Primer mix为权利要求1所述的各KASP引物中上游引物5’端分别修饰不同荧光标签序列后，与下游通用引物形成的混合物；

所述荧光标签序列为：5’-FAM-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；

5’-HEX-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR反应体系为：DNA模板1.5μL，KASP ROX standard reaction mix 0.5μL，KASP Primer mix 0.014μL，ddH₂O 0.5μL；所述KASP Primer mix中各引物的浓度为100μM；

PCR反应程序为：94℃ 15min；94℃ 20s，61-55℃ 1min，每个循环降低0.6℃，10个循环；94℃ 20s，58℃ 1min，30个循环。