[发明专利]一种利用miR-203/SNAI2轴调节前列腺肿瘤血管生成的方法

说明书

本发明涉及分子检测技术领域，尤其涉及microRNA检测和治疗前列腺癌(PCa)的方法。本发明提供了miR‑203/SNAI2轴对前列腺癌的体外及体内生物学特性的影响。具体的，在DU145和PC3细胞中表达miR‑203降低血管生成，通过表达miR‑203和SNAI2可改善miR‑203的抑制作用。miR‑203抑制了前列腺癌细胞的内皮细胞形成和血管的生成。

技术领域

本发明涉及分子检测技术领域，尤其涉及microRNA检测和治疗前列腺癌(PCa)的方法。本发明提供了miR-203/SNAI2轴可作为PCa的诊断和治疗靶点。

背景技术

近年来前列腺癌(Prostate cancer，PCa)的发病率和死亡率急剧上升，其增长率位居肿瘤之首。同时，PCa的防治面临着两大临床难题，即早期诊断指标特异性差和晚期治疗方法效果不佳。前列腺癌的发生和进展是涉及多基因突变和基因调控异常的多步过程。越来越多的证据表明，特定基因调控异常，包括microRNAs(miRNAs)和长链非编码RNA(lncRNAs)，是PCa的发病和发展的主要原因。尽管如此，在PCa中miRNAs和lncRNAs之间的交叉效应仍然不是很清楚。研究发生在PCa中的miRNA-lncRNA的效应机制不仅可以提高我们对PCa的认知，也将有助于确定治疗PCa的靶点。

越来越多的证据表明，miR-203参与多种生理和病理过程，包括上皮分化、癌细胞增殖、转化和凋亡。有趣的是，不同的文献表明，miR-203参与GSK3β/β-CATENIN通路。例如，Annie Zhang等人报道，miR-203抑制了与PIK3CA、p38 MAPK、c-Jun和GSK-3信号信号相关的肝癌的增殖。在黑素瘤细胞中，β-catenin抑制miR-203转录。另一方面，在我们之前的论文中，我们已经证明，miR-203在转移性乳腺癌细胞中通常是表观沉默的，而miR-203的下调则与靶向SNAI2密切相关。在此之后，其他实验室的一些研究也表明，miR-203/SNAI2轴在不同类型的癌症中起着关键作用，包括卵巢癌、胶质母细胞瘤和乳腺癌。尽管易瞿等人报道，miR-182和miR-203的表达在从正常前列腺上皮EP156T细胞到子代非转换EPT1 间质细胞的上皮间质转变(EMT)过程中被压抑，而miR-182和miR-203在正常前列腺上皮细胞的过表达可以通过调节SNAI2的表达诱导间质到上皮的转变(MET)，但是，miR-203/SNAI2轴对肿前列腺癌细胞，包括细胞增殖、迁移、血管生成、具备干细胞、异种移植生长和相关信号通路等的关键作用，并没有相关的记录和报道。

在本研究中，我们旨在阐明miR-203/SNAI2轴在前列腺肿瘤血管生成中的确切作用。结果表明，miR-203/SNAI2轴可以调控肿瘤发生和血管生成，miR-203在肿瘤细胞中的表达显著降低了干细胞的生长，其抑制作用可以通过转染pSIN-SNAI2减弱。这些发现为miR-203和SNAI2在恶性肿瘤细胞的诊断和治疗提供了新的理论依据和可能性。

发明内容

本发明确定了miR-203/SNAI2轴在体内和体外都与肿瘤血管生成有关。血管生成在包括肿瘤进展在内的生理和病理过程中起着至关重要的作用。为了进一步检验miR-203/轴在血管生成中的作用，我们确定了在DU145和PC3细胞中miR-203和SNAI2表达的变化是否直接调节内皮细胞的行为，如管形成，这是血管生成的标志。我们从有效地过表达了miR-203的DU145和PC3细胞中收集了条件培养基，并将其应用到HuVECs中用于血管形成实验。结果表明，在PC3和DU145细胞中，miR-203的异位表达显著降低了HuVECs中的累积管长，而pSIN-SNAI2的转染则可以改善miR-203的抑制作用(图1A和1B)。与此同时，在体内异种移植模型中，通过过度表达miR-203可以明显降低异种移植组织中微血管的数量，SNAI2的再表达可以部分逆转miR-203诱导的抑制效应(图1C和1D)。

附图说明