[发明专利]丝瓜果实苦味基因LaBt及用于果实苦味性状辅助选择的分子标记

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体涉及有棱丝瓜苦味位点LaBt的基因组序列、CDS序列、蛋白质序列，对应位点的普通丝瓜基因组序列，依据上述有棱丝瓜、普通丝瓜间序列差异发展的多态标记及应用。本发明通过分子标记技术，构建丝瓜的遗传连锁图谱，定位了丝瓜苦味基因LaBt，获得与LaBt基因共分离的InDel分子标记LuBt1‑2，建立了分子标记辅助选择体系，并最终获得了该位点的基因组序列。本发明有助于实现丝瓜果实苦味性状的分子标记辅助选择，克服感官品尝鉴定果实苦味方法的缺点，省时省力。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及克隆的有棱丝瓜果实苦味位点LaBt的基因组序列、对应位点普通丝瓜的基因组序列、两者之间的SNP及InDel差异信息及应用、新开发的用于遗传图谱构建的SSR标记及精细定位标记、鉴定有棱丝瓜苦味性状的InDel分子标记LuBt1-2及其引物和应用。

背景技术

丝瓜是葫芦科蔬菜重要作物之一，在我国普遍栽植的有棱丝瓜[Luffaacutangula(L.)Roxb.]以及普通丝瓜[Luffa cylindrica(L.)Rome.]两个亚种，各自具有许多优良性状，如有棱丝瓜果肉脆、不褐变，普通丝瓜产量高、抗性强。有棱丝瓜与普通丝瓜都不苦，都能食用，但两个亚种杂交会产生苦味，说明两个亚种中含有不同的、使苦味合成途径完整的互补基因。因为苦味给消费者带来不利的健康影响，从而为丝瓜两个种间优良基因的综合利用带来麻烦，因此，丝瓜选育种中需要剔除苦味这一性状。

在育种工作中，目前国内外广大育种科学家只能用感官品尝来鉴定丝瓜苦味的存在与否。

通常的工作程序为：果实达到商品果时，对成熟瓜近果柄处果肉进行品尝，由3名志愿者独立进行品尝、记录，相互之间不透露自己的结果避免相互干扰。为了减少前面果实苦味物质在口腔残留影响下一个果实的鉴定，要求志愿者在品尝每一个果实后都用清水进行漱口；为了避免味蕾工作疲劳，每天鉴定的果实数量不超过40个。3人出现分歧时找味觉未被干扰的第四人或者第五人鉴定，最后确定果实苦味与否。

感官品尝果实苦味与否方法的主要缺点为：

1)鉴定比较费时费力；

2)各品尝者对苦味的敏感性不同；而且味蕾容易出现工作疲劳，导致鉴定结果常常不一致；

3)只能在果实阶段进行鉴定，在种子、幼苗或植株阶段不能鉴定，不能提前淘汰结苦味果实的植株；

4)植株所结果实苦味的出现容易受环境的影响，有时苦有时不苦，导致鉴定不准确。

因此，克隆果实苦味基因、阐明果实苦味的分子机理，开发新的丝瓜苦味性状鉴定方法，对于丝瓜育种具有紧迫而重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供有棱丝瓜果实苦味基因、建立有棱丝瓜果实苦味性状的分子标记辅助选择体系。

本发明的目的还在于提供上述有棱丝瓜果实苦味位点的基因组序列及普通丝瓜对应位点的基因组序列。

本发明的目的还在于提供一种效率高、准确率高、以及成本低的丝瓜果实苦味位点的鉴定方法以及引物。

本发明的目的还在于实现有棱丝瓜果实苦味位点的分子标记辅助育种，指导丝瓜育种实践工作，同时在分子水平上揭示丝瓜果实苦味遗传规律。

本发明的上述目的通过以下技术手段实现：

本发明主要是应用分子标记技术寻找与有棱丝瓜果实苦味性状的分子标记，通过图位克隆法、同源克隆法克隆有棱丝瓜果实苦味位点的基因组序列。

一方面，本发明定位了有棱丝瓜苦味基因，将其命名为LaBt，其位于丝瓜遗传连锁图谱的连锁群6上的标记SGE292与SGC196之间，与两个标记的遗传距离分别为6.3cM、3.0cM，其具有SEQ IDNO.137所示的核苷酸序列。