[发明专利]一株鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用

说明书

本发明涉及动物病毒学领域，本发明提供了一株低温连续传代的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株（SD 165）制备方法及其生物学特性，以及其在生物学上的应用,其保藏号为CGMCC NO：14887；SD 165制成疫苗后，免疫1周龄SPF鸡，通过对同源和异源H9N2禽流感野毒株的保护效果分析，证明SD 165可以用作H9亚型禽流感活疫苗备用毒株。本发明为使用H9N2亚型禽流感冷适应株活疫苗防治禽流感爆发提供疫苗备用株，并且为如何筛选禽流感活疫苗株提供技术方案，具有重要公共卫生意义。

技术领域

本发明涉及动物病毒学领域，本发明提供了一株鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株(SD 165)的筛选方法及其生物学特性，以及其在生物学上特别是在SPF鸡免疫上的应用。

背景技术

禽流感病毒(AIV)隶属于正粘病毒科A型流感病毒属，基因组分为8个节段。核酸总长度约为13.6kb，编码至少11个病毒蛋白。由于AIV负链、分节段的RNA病毒性质，病毒很容易发生变异并不断的突破其感染宿主的种属障碍，引起新的流感流行。AIV据其致病性可分为高致病性AIV(Highly Pathogenic Avian Influenza virus，HPAlV)和低致病性AIV(LowPathogenic Avian Influenza virus,LPAIV)，感染家禽的HPAIV和LPAIV分别以H5和H9亚型为主。

H9N2亚型流感属于低致病性流感病毒，但它的危害却不容忽视。H9N2AIV在世界范围内广泛存在，在北美，H9N2AIV主要存在于海鸟和野鸭体内(Kawaoka et al.1988；Sharpet al.1993)。1966年，H9N2AIV开始在美国火鸡群中广泛暴发流行(Homme et al.1970)，1981至1996年美国连续爆发过16次H9N2AIV感染火鸡群事件(Alexander 2000)。

H9N2亚型是目前我国鸡群中存在的AIV的主要亚型，占禽流感总发病率90％以上。H9N2亚型禽流感发病后虽然致死率不高(一般不超过30％)，但常导致呼吸道症状，蛋鸡的产蛋下降，并使鸡群易继发严重的呼吸道疾病，影响家禽生产性能；肉鸡感染后造成免疫抑制，容易造成继发感染和混合感染，从而给肉鸡养殖业造成巨大经济损失。众所周知，禽流感病毒变异非常快，因此及时的发现新的毒株研究其特性，并最终筛选出可以作为疫苗株的毒株是保证禽流感疫苗效果的最重要方式之一。

目前国内用来预防H9N2禽流感爆发的疫苗主要是灭活疫苗，由于灭活疫苗主要提供体液免疫，能够刺激机体产生抗体，但不能提供粘膜免疫保护，鸡群免疫后不能获得有效的细胞免疫，因此许多鸡场，免疫了H9疫苗，还是有零星发病。禽流感作为呼吸道疫病，病毒的入侵门户为上呼吸道；即使机体具有一定水平的血清抗体，如果上呼吸道没有粘膜抗体，鸡只照样能够感染病毒和发病，这是临床上高抗体水平鸡发病的主要原因之一。如果能够研发一种H9N2禽流感活疫苗，免疫后将会诱导机体产生粘膜免疫，大大改善目前养殖企业对H9N2禽流感的防控效果。

发明内容

本发明的发明人提供了一株通过在10日龄的SPF鸡胚上连续低温传代，获得的A/Chicken/Shandong/165/2013(H9N2)(简称SD 165)禽流感病毒冷适应株，并提供了该毒株的全基因组序列，阐明流感病毒主要抗原保护蛋白HA基因片段与国内近几年流行的H9N2流行毒株在一个进化分支之内。从而为筛选H9N2病毒活疫苗备用毒株的供分子流行病学基础；同时提供了该冷适应毒株作为流感活疫苗株的试验数据和指标，以明确其作为H9N2流感活疫苗备用毒株的可行性。

发明人对该毒株进行了生物保藏，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；其保藏编号为：CGMCC NO：14887,保藏日期为2017年11月21日，分类命名为N9H2亚型低致病性禽流感病毒冷适应株。

该病毒的全基因组序列测定表明，其HA基因隶属于H9-4.2.5.3like谱系，与近几年国内H9N2流行株同属于一个进化分支，可以用来作为H9N2禽流感活疫苗株的候选毒株。