[发明专利]一种具有抑菌-促成骨双功能的多孔微球细胞支架及其制备方法

权利要求书

1.一种具有抑菌-促成骨双功能的多孔微球细胞支架的制备方法，微球由生物可降解脂肪族聚酯-聚乙二醇两亲性嵌段共聚物多孔微球及其表面依次负载的聚多巴胺、银纳米粒子和羟基磷灰石构成，其表面有利于细胞的粘附和增殖，其负载的银纳米粒子提供抑菌活性，其负载的羟基磷灰石提供成骨活性，是一种可注射的骨缺损再生修复材料

其特征是采用水包油包水双乳液方法结合表面改性技术，通过以下步骤完成：

(1)将脂肪族聚酯-聚乙二醇嵌段共聚物0.5g溶于5-50mL二氯甲烷中，得到溶液A；

(2)向步骤(1)配置的溶液A中加入0.05-0.10g的表面活性剂司班80和1-5mL去离子水，200-400W超声处理3-10分钟，得到油包水乳液B；

(3)将0.05-0.10g吐温60，1-5g的稳定剂和300mL去离子水混合配置得到溶液C，于100-500rpm搅拌下，向此溶液C中滴加步骤(2)制备得到的乳液B，滴加完毕后，在室温下继续搅拌4-8h至二氯甲烷完全挥发后，停止搅拌，在3000-4000rpm下离心10-20分钟收集硬化成型的微球，去离子水洗涤3-5次后，得到生物可降解多孔微球I；

(4)配置0.5-2mg/mL的多巴胺水溶液，调控pH范围为7.2-8.5，将步骤(3)得到的多孔微球I悬浮于其中，室温反应12-48h后，在3000-4000rpm下离心10-20分钟收集微球，去离子水洗涤3-5次后，得到聚多巴胺包覆改性的生物可降解多孔微球II；

(5)避光配置1-5mg/mL的硝酸银水溶液，将步骤(4)得到的多孔微球II悬浮于其中，室温反应2-6h后，在3000-4000rpm下离心10-20分钟收集微球，去离子水洗涤3-5次后，得到负载银纳米粒子的生物可降解多孔微球III；

(6)配置模拟体液，其浓度是标准模拟体液的1-10倍；将步骤(5)得到的多孔微球III悬浮于其中，根据模拟体液的浓度，体系在37℃反应3h-7天后，在3000-4000rpm下离心10-20分钟收集微球，去离子水洗涤3-5次后，得到具有抑菌和促成骨分化双功能的多孔微球。

2.根据权利要求1所述的一种具有抑菌-促成骨双功能的多孔微球细胞支架的制备方法，其特征是步骤(1)中的脂肪族聚酯-聚乙二醇嵌段共聚物，是聚酯-聚乙二醇两嵌段共聚物和聚酯-聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中的一种，脂肪族聚酯是聚丙交酯、聚乙交酯、聚己内酯及它们的共聚物中的任一种，嵌段共聚物分子量范围为5-15万，其中，聚乙二醇嵌段分子量范围为2000-6000，脂肪族聚酯嵌段分子量范围为20000-50000，共聚物溶液浓度为10-100mg/mL。

3.根据权利要求1所述的一种具有抑菌-促成骨双功能的多孔微球细胞支架的制备方法，其特征是步骤(3)中的稳定剂为明胶、聚乙烯醇和聚乙烯基吡咯烷酮中的一种，其浓度范围为10-100mg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种具有抑菌-促成骨双功能的多孔微球细胞支架的制备方法，其特征是步骤(4)中的多巴胺水溶液，选取的多巴胺浓度为0.5-2mg/mL，溶液pH值为8.5，反应时间为24h。

5.根据权利要求1所述的一种具有抑菌-促成骨双功能的多孔微球细胞支架的制备方法，其特征是步骤(5)中的硝酸银水溶液，选取的硝酸银浓度为1-5mg/mL，反应时间为4h。

6.根据权利要求1所述的一种具有抑菌-促成骨双功能的多孔微球细胞支架的制备方法，其特征是步骤(6)中的模拟体液，其浓度是标准模拟体液的5倍浓度。