[发明专利]一种检测HLA-B27亚型基因位点的方法及其试剂盒和用途

说明书

一种检测HLA‑B27亚型基因位点的方法及其试剂盒和用途,本发明涉及分子生物学和医学领域，本发明提供一种用于检测HLA‑B27亚型基因位点的试剂盒，该试剂盒内包含的引物序列相较于现有的技术，可以对HLA‑B更加精准测序。本发明的有益效果在于：本发明提供的引物及反应体系可以灵敏、快速低检测人血样本中HLA‑B*27基因亚型携带情况，可为腰背痛患者及临床症状特征不典型患者预测强直性脊柱炎患病风险提供可靠实验证据，指导临床治疗选择。

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测HLA-B27亚型基因位点的试剂盒，通过同时检测HLA-B*2702,B*2704,B*2705,B*2710，B*2715风险亚型和B*2706,B*2709这两个保护亚型的基因型来评估患者患强直性脊柱炎发病风险。

背景技术

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是属于脊柱关节炎的范畴，是一种累及脊柱及外周关节的慢性炎症，常表现为颈、胸、腰椎及骶髂关节的炎症及骨化，伴或不伴髋关节受累。此病多见于男性，起病隐匿，发展缓慢，发病年龄多在10～40岁，以20～30岁为高峰。16岁以前发病者称幼年型AS，45～50岁以后发病者称为晚发型AS，两种特殊类型的临床表现均不典型。

目前研究证实AS与人类白细胞抗原HLA-B27之间存在强关联性，AS患者中HLA-B27的阳性率高达90％以上，而正常群体中仅为4％-7％，HLA-B27携带者患AS的相对危险率比值高达70。HLA-B27根据等位基因的不同，有多种分型。迄今为止，IMGT/HLA数据库搜索结果显示HLA-B*27等位基因已达132个，其中我国汉族人群中的HLA-B*27亚型以B*2704、B*2705为主。目前比较肯定的AS易感基因亚型有：B*2702，B*2704和B*2705；B*2702与Behcet’s病有弱的相关性；汉族人群中B*2704与强直性脊柱炎相关性较强；AS患者携带HLA-B*2705等位基因比携带B*2704患眼炎、指趾炎风险更高，发病年龄也相对较晚。AS患者眼炎的发生与HLA-B*2705明显相关，HLA-B*2706和HLA-B*2709亚型的发病风险最弱。HLA-B*2715尽管为罕见亚型，但至今只见于AS患者，未见于健康人。在中国人群中，B*2715亚型在幼年强直性脊柱炎(JAS)中轻微增多，携带该基因亚型的表现有早发病趋势。上述研究提示AS患者进行HLA-B27亚型基因分型十分必要。

目前针对HLA-B27的检测，主要有以下几种：基于HLA-B*27抗原的检测方法有微量淋巴细胞毒法和流式细胞术；基于HLA-B27基因的检测方法有PCR-SSP法，荧光PCR染料法、PCR-SSO等。基因检测方法基于已知的DNA序列进行引物探针设计，通过电泳或信号进行基因分型，可出现一些模棱两可的分型结果，表现依照试剂分型格局判断可能出现多条带或少条带、探针的多余或缺少、不同方法结果的不一致，难以定型。而测序法尽管技术方法要求较高，但该检测方法准确性高，分析彻底，结果可靠成为基因分型金标准，目前测序分析较为常用的软件是uTYPE HLA序列分析软件，而目前对HLA-B精准测序的关键在于引物扩增的有效性和精确性，因此，提供精准的引物序列及其扩增方法用来检测HLA-B27的亚型基因分型十分必要。

发明内容

为克服上述提到的问题，本发明提供一种用于检测HLA-B27亚型基因位点的试剂盒，该试剂盒内包含的引物序列相较于现有的技术，可以对HLA-B更加精准测序。

一种用于检测HLA-B27亚型基因位点的试剂盒，所述的试剂盒包括有如下序列的引物：